[發明專利]PIK3CA基因和BRAF基因突變多重檢測引物探針及其試劑盒在審
| 申請號： | 202111617387.1 | 申請日： | 2021-12-28 |
| 公開（公告）號： | CN114214412A | 公開（公告）日： | 2022-03-22 |
| 發明（設計）人： | 洪專;潘文健 | 申請（專利權）人： | 普瑞斯新（上海）生物醫療科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6886 | 分類號： | C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 常州市江海陽光知識產權代理有限公司 32214 | 代理人： | 蔣欣 |
| 地址： | 201802 上海市嘉定區*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | pik3ca 基因 braf 基因突變 多重 檢測 引物 探針 及其 試劑盒 | ||
1.一種PIK3CA基因和BRAF基因突變多重檢測引物探針，其特征在于：包括檢測PIK3CA基因E545K突變的上游引物F-E545、下游引物R-E545、野生型探針WP-E545和突變型探針MP-E545K，檢測PIK3CA基因H1047R突變的上游引物F-H1047、下游引物R-H1047、野生型探針WP-H1047和突變型探針MP-H1047R，以及檢測BRAF基因V600E突變的上游引物F-V600、下游引物R- V600、野生型探針WP- V600和突變型探針MP- V600E；
所述上游引物F-E545的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物R-E545的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述野生型探針WP-E545的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述突變型探針MP-E545K的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；
所述上游引物F-H1047的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述下游引物R-H1047的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，所述野生型探針WP-H1047的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，所述突變型探針MP-H1047R的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；
所述上游引物F-V600的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示，所述下游引物R-V600的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示，所述野生型探針WP-V600的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，所述突變型探針MP-V600E的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示。
2.根據權利要求1所述的PIK3CA基因和BRAF基因突變多重檢測引物探針，其特征在于：所述突變型探針MP-E545K的使用濃度為50nM，所述突變型探針MP-H1047R的使用濃度為30nM，所述突變型探針MP-V600E的使用濃度為10nM。
3.根據權利要求1所述的PIK3CA基因和BRAF基因突變多重檢測引物探針，其特征在于：所有引物的使用濃度為50nM。
4.根據權利要求1所述的PIK3CA基因和BRAF基因突變多重檢測引物探針，其特征在于：所有野生型探針的使用濃度為20nM。
5.根據權利要求1所述的PIK3CA基因和BRAF基因突變多重檢測引物探針，其特征在于：所有野生型探針和突變型探針為經過修飾的MGB探針，所有野生型探針的5’端為VIC熒光基團修飾，所有突變型探針的5’端為FAM熒光基團修飾，所有突變型探針的3’端為NFQ基團修飾。
6.一種采用如權利要求1所述的引物探針的PIK3CA基因和BRAF基因突變多重檢測試劑盒。
7.根據權利要求6所述的PIK3CA基因和BRAF基因突變多重檢測試劑盒，其特征在于：還包括帶有PIK3CA基因E545K突變、H1047R突變與BRAF基因V600E突變的質粒。
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