[發明專利]腫瘤細胞PD-L1PD-L2免疫熒光+FISH檢測試劑盒在審

申請號：	202111598468.1	申請日：	2021-12-24
公開（公告）號：	CN114487415A	公開（公告）日：	2022-05-13
發明（設計）人：	郭曉敏;薛艷文	申請（專利權）人：	江蘇萊爾生物醫藥科技有限公司
主分類號：	G01N33/574	分類號：	G01N33/574;G01N33/58;C12Q1/6886;C12Q1/6841
代理公司：	常州中潤迅達專利代理事務所(普通合伙) 32624	代理人：	曹誠
地址：	225300 江蘇省泰州市醫藥***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	腫瘤細胞 pd l1pd l2 免疫熒光 fish 檢測試劑盒
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【說明書】：

本發明涉及醫藥生物技術領域，尤其涉及腫瘤細胞PD?L1PD?L2免疫熒光+FISH檢測試劑盒，包括Buffer?Ⅰ、Buffer?Ⅱ、Buffer?Ⅲ、封閉液、PD?1/PD?L1抗體、CD45抗體、二抗、抗體稀釋液、DAPI、陽性對照片、10×CF2固定液、探針、甲酰胺工作液、20×SSC以及BSA溶液，其使用方法包括以下步驟：S1、血液及其他體液的取樣：對于血液取樣而言，采用EDTA、枸櫞酸鈉、草酸鉀/氟化鈉、肝素、ACD抗凝的5mL真空采血管，采血完畢后立即顛倒混勻8次；對于其他體液而言，將臨床抽取的胸腹水、腦脊液、灌洗液即注入含有抗凝劑的瓶內并搖勻，且體液體積＞10ml。本發明取材方便，有助于對體液中循環腫瘤細胞進行表型分析，可有效反應PD?L1的表達、轉移表達、檢測。

技術領域

本發明涉及醫藥生物技術領域，尤其涉及腫瘤細胞PD-L1PD-L2免疫熒光+FISH檢測試劑盒。

背景技術

PD治療是目前最有效的應用于癌癥患者的免疫治療方法，其證實了在十余種晚期癌癥，包括肺癌、腎癌、黑色素瘤、頭頸癌、膀胱癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、食管癌、腦膠質瘤、結腸癌、何杰金氏淋巴瘤等都有著顯著的療效。但研究發現抗PD通路療法并非對所有腫瘤病人都有效，PD-1/PD-L1抗體只對每一種癌癥的一部分病人有效果。患者中PD-L1的陽性判斷現在主要是通過免疫組化檢測對腫瘤組織進行檢測，目前多數實驗判斷PD-L1是否陽性的主觀性很強，還需大規模的臨床實驗和預后分析給于客觀支持，而且還存在著受腫瘤異質性的影響以及著絲粒擴增從而導致不能夠反應細胞中蛋白表達的實際情況等問題。

熒光原位雜交(FISH)是一項在體外直接觀察下撥中特定核酸的技術。根據堿基互補配對的原則，特定的DNA序列與細胞內的目標序列互補結合，DNA探針用熒光素分子標記，通過雜交到染色體上后通過合適的激發光照射，雜交探針及目標DNA能夠在顯微鏡下被清楚的觀察到，可以來檢測DNA序列在染色體上的定性、定位、相對定量分析。采用熒光標記的著絲粒探針進行FISH操作可以在基因水平對染色體著絲粒的變異進行檢測。

因此，如何將基因水平的FISH技術與蛋白水平的免疫熒光染色技術相結合，以此來改善治療方案是我們亟需解決的問題。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術中存在的缺點，而提出的腫瘤細胞PD-L1PD-L2免疫熒光+FISH檢測試劑盒。

腫瘤細胞PD-L1PD-L2免疫熒光+FISH檢測試劑盒，其特征在于，包括

2、腫瘤細胞PD-L1PD-L2免疫熒光+FISH檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、血液及其他體液的取樣；

S2、樣本的富集：

對于血液樣本而言，采用“人外周血白細胞去除試劑盒”進行富集；

對于其他體液樣本而言，采用“人體液擴增型腫瘤細胞檢測試劑盒”進行富集；

S3、樣本的蛋白檢測：包括檢測前準備、免疫熒光染色、復染和結果觀察及判斷；

S4、FISH檢測：包括檢測前準備、FISH染色、CD45染色、DAPI復染和結果觀察及判斷。

優選的，所述S1中血液的取樣過程為：采用EDTA、枸櫞酸鈉、草酸鉀/氟化鈉、肝素、ACD抗凝的5mL真空采血管，采血完畢后立即顛倒混勻8次；其他體液的取樣過程為：將臨床抽取的胸腹水、腦脊液、灌洗液即注入含有抗凝劑的瓶內并搖勻，且體液體積＞10ml。