[發明專利]一種用于林可鏈霉基因工程菌的種子培養基及培養發酵生產林可霉素的方法

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• 申請號: 202111596469.2
• 申請日: 2021-12-24
• 公開（公告）號: CN114317390A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 吳杭;吳森帝;劉輝;劉瑞華;任啟偉;張部昌;潘梓祥;時瑞峰
• 申請（專利權）人: 安徽大學;新宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P19/64;C12R1/565
• 代理公司: 合肥興東知識產權代理有限公司 34148
• 代理人: 商德平

本發明公開了一種用于林可鏈霉基因工程菌的種子培養基及培養發酵生產林可霉素的方法。該種子培養基，按質量濃度，原料包括：玉米漿30～40g/L、黃豆餅粉10～15g/L、淀粉15～25g/L、葡萄糖5～15g/L、硫酸銨1～3g/L、碳酸鈣3～5g/L，水余量。本發明從優化培養基種子質量著手，建立適配于林可霉素基因工程菌種子培養基,解決了現有的發酵工藝與基因工程改造的新菌種之間存在的匹配性較低的問題，本發明優化后的種子液進行發酵，在搖瓶水平林可霉素的產量為3.862g/L，比原始培養基(3.009g/L)發酵生產林可霉素產量提高了28％以上。本發明利用優化后的種子液進行發酵，在15L發酵罐水平林可霉素的最高產量為6.56g/L，比原始培養基(5.17g/L)發酵生產林可霉素產量提高了25％以上。

技術領域

本發明涉及微生物發酵領域，尤其涉及一種用于林可鏈霉基因工程菌的種子培養基及培養發酵生產林可霉素的方法。

背景技術

林可霉素由林可酰胺和丙基脯氨酸經縮合反應生成，其作用機制為作用于敏感菌核糖體的50S亞基，阻止肽鏈的延長，抑制細菌細胞的蛋白質合成從而起抗菌作用。近年來，林可霉素及衍生物進出口總量及總額正逐年上升，鑒于林可霉素具有巨大的藥用和經濟價值，因此提高林可霉素的產量十分有必要。

目前林可霉素主要通過林可鏈霉菌發酵產生，獲得高產菌株和優化發酵工藝是提高林可霉素產量的兩條有效途徑。

微生物發酵工藝一般分為菌種制備、種子培養、發酵和下游過程等不同階段。多數研究人員集中在發酵階段進行研究，而種子培養的最適組分和生理狀態往往被忽視，這可能導致微生物發酵過程中發酵階段的失敗。而且不同菌株有其最適的發酵工藝，現有的發酵工藝與基因工程改造的新菌種的匹配性是亟待解決的關鍵共性問題。林可霉素發酵過程中，搖瓶水平種子培養基和發酵罐水平一級種子培養基的組分比例一致，優化其種子培養基更便于在工業上的應用。而目前還未有針對林可鏈霉基因工程菌做過這方面的研究。

發明內容

本發明的主要目的在于提供一種用于林可鏈霉基因工程菌的種子培養基及培養發酵生產林可霉素的方法，旨在解決現有技術未有針對林可鏈霉基因工程菌的種子培養基的問題。

為實現上述目的，本發明提供了一種用于林可鏈霉基因工程菌的種子培養基，按質量濃度，原料包括：玉米漿30～40g/L、黃豆餅粉10～15g/L、淀粉15～25g/L、葡萄糖5～15g/L、硫酸銨1～3g/L、碳酸鈣3～5g/L，水余量。

進一步地，各原料的質量濃度為：玉米漿36.357g/L、黃豆餅粉13.441g/L、淀粉20g/L、葡萄糖10g/L、硫酸銨1.5g/L、碳酸鈣4g/L，水余量。

本發明還提供上述種子培養基在林可鏈霉基因工程菌培養發酵生產林可霉素中的應用。

本發明還提供一種通過林可鏈霉基因工程菌培養發酵生產林可霉素的方法，包括以下步驟：

將林可鏈霉基因工程菌在斜面培養基上于30℃溫度條件下培養7d，然后將培養得到的孢子接種于如權利要求1或2所述的種子培養基中，于30℃溫度條件下振蕩培養48h，然后轉接至發酵培養基中進行培養發酵。

進一步地，所述斜面培養基，按質量濃度，原料包括：可溶性淀粉20g/L、黃豆餅粉5g/L、氯化鈉0.5g/L、硝酸鉀1g/L、七水硫酸亞鐵0.01g/L、七水硫酸鎂1.02g/L、三水磷酸氫二鉀0.66g/L、瓊脂18g/L、水余量。

進一步地，所述發酵培養基，按質量濃度，原料包括：葡萄糖100g/L、黃豆餅粉20g/L、玉米漿1.5g/L、硝酸鈉8g/L、氯化鈉5g/L、硫酸銨6g/L、磷酸氫二鉀0.3g/L，水余量；

定容后用5mol/L的NaOH溶液調節pH至7.45-7.5，混勻后加入8g/L碳酸鈣。

本發明還提供一種通過林可鏈霉基因工程菌培養發酵生產林可霉素的方法，包括以下步驟：