[發明專利]一種用于林可鏈霉基因工程菌的種子培養基及培養發酵生產林可霉素的方法

在審

• 申請號: 202111596469.2
• 申請日: 2021-12-24
• 公開（公告）號: CN114317390A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 吳杭;吳森帝;劉輝;劉瑞華;任啟偉;張部昌;潘梓祥;時瑞峰
• 申請（專利權）人: 安徽大學;新宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P19/64;C12R1/565
• 代理公司: 合肥興東知識產權代理有限公司 34148
• 代理人: 商德平

1.一種用于林可鏈霉基因工程菌的種子培養基，其特征在于：按質量濃度，原料包括：玉米漿30～40g/L、黃豆餅粉10～15g/L、淀粉15～25g/L、葡萄糖5～15g/L、硫酸銨1～3g/L、碳酸鈣3～5g/L，水余量。

2.如權利要求1所述的用于林可鏈霉基因工程菌的種子培養基，其特征在于，各原料的質量濃度為：玉米漿36.357g/L、黃豆餅粉13.441g/L、淀粉20g/L、葡萄糖10g/L、硫酸銨1.5g/L、碳酸鈣4g/L，水余量。

3.如權利要求1或2所述的種子培養基在林可鏈霉基因工程菌培養發酵生產林可霉素中的應用。

4.一種通過林可鏈霉基因工程菌培養發酵生產林可霉素的方法，其特征在于，包括以下步驟：

將林可鏈霉基因工程菌在斜面培養基上于30℃溫度條件下培養7d，然后將培養得到的孢子接種于如權利要求1或2所述的種子培養基中，于30℃溫度條件下振蕩培養48h，然后轉接至發酵培養基中進行培養發酵。

5.如權利要求4所述的通過林可鏈霉基因工程菌培養發酵生產林可霉素的方法，其特征在于，所述斜面培養基，按質量濃度，原料包括：可溶性淀粉20g/L、黃豆餅粉5g/L、氯化鈉0.5g/L、硝酸鉀1g/L、七水硫酸亞鐵0.01g/L、七水硫酸鎂1.02g/L、三水磷酸氫二鉀0.66g/L、瓊脂18g/L、水余量。

6.如權利要求4所述的通過林可鏈霉基因工程菌培養發酵生產林可霉素的方法，其特征在于，所述發酵培養基，按質量濃度，原料包括：葡萄糖100g/L、黃豆餅粉20g/L、玉米漿1.5g/L、硝酸鈉8g/L、氯化鈉5g/L、硫酸銨6g/L、磷酸氫二鉀0.3g/L，水余量；

定容后用5mol/L的NaOH溶液調節pH至7.45-7.5，混勻后加入8g/L碳酸鈣。

7.一種通過林可鏈霉基因工程菌培養發酵生產林可霉素的方法，其特征在于，包括以下步驟：

將林可鏈霉基因工程菌在斜面培養基上于30℃溫度條件下培養7d，然后將培養得到的孢子接種于如權利要求1或2所述的種子培養基中，于30℃溫度條件下轉動培養48h，然后將培養得到的一級種子轉接至二級種子培養基中，于30℃溫度條件下培養至培養基pH達6.8以上，之后接種至含有罐培培養基的發酵罐內進行培養發酵。

8.如權利要求7所述的通過林可鏈霉基因工程菌培養發酵生產林可霉素的方法，其特征在于，所述二級種子培養基，按質量濃度，原料包括：淀粉4g/L、黃豆餅粉10g/L、玉米漿15g/L、葡萄糖28g/L、硫酸銨2.5g/L、氯化鈉6g/L、磷酸二氫鉀0.3g/L，水余量；

定容后用5mol/L的NaOH溶液調節pH至7.2，混勻后加入10g/L碳酸鈣。

9.如權利要求7所述的通過林可鏈霉基因工程菌培養發酵生產林可霉素的方法，其特征在于，所述罐培培養基，按質量濃度，原料包括：淀粉4.5g/L、黃豆餅粉15.4g/L、玉米漿15.4g/L、葡萄糖17.5g/L、硫酸銨4.3g/L、氯化鈉8.5g/L、磷酸二氫鉀0.3g/L、硝酸銨4.3g/L、硝酸鈉4.8g/L、水余量；

定容后用5mol/L的NaOH溶液調節pH至7.45-7.5，混勻后加入7.7g/L碳酸鈣，1g/L泡敵。