[發明專利]多重分析物的檢測方法

在審

• 申請號: 202111590524.7
• 申請日: 2021-12-23
• 公開（公告）號: CN114689845A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 姜文婷;陳建安;陳振泰
• 申請（專利權）人: 財團法人工業技術研究院
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/68
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝

本發明提供一種可有效提高檢測靈敏度的多重分析物的檢測方法，包括以下步驟：提供微米粒子。微米粒子耦合有至少一種第一配體，且包括本體以及形成于本體的表面的多個第一突起物。接著，將微米粒子與多種待分析物混合，以形成第一復合物。爾后，將第一復合物與帶有多種標記的多種第二配體混合，以使多種第二配體結合至第一復合物中的多種待分析物并形成第二復合物。最后，對第二復合物中的多種第二配體的多種標記進行檢測。

技術領域

本發明涉及一種分析物的檢測方法，尤其涉及一種多重分析物的檢測方 法。

背景技術

配體結合分析法(Ligand binding assay)是一種依賴配體分子與分析物的 親和結合的檢測方法，其中酵素結合免疫吸附分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)是最廣為使用的檢測方法。傳統的ELISA是 利用抗體與抗原專一性結合的特性，配合酵素反應來進行檢測，技術發展已 相當成熟。然而，ELISA的缺點是檢測時間冗長且一個反應僅能檢測一種分 析物。

目前，市場上應用于多重蛋白免疫檢測的產品是以傳統的三明治法為基 礎，先利用帶有不同顏色的圓球狀微米粒子與抗體耦合，接著使耦合有抗體 的圓球狀微米粒子結合至目標抗原，再利用帶有特定熒光標記的偵測抗體結 合至待分析抗原，并以流式細胞儀來進行分析，進而達到多重蛋白檢測的目 的。然而，上述多重蛋白免疫檢測仍具有以下缺點：需使用多種熒光顏色的 微米粒子、檢測前需針對不同熒光顏色的微米粒子設定熒光圖譜、且操作時 需區分不同標記的粒子再進行訊號分析，整體而言檢測時間冗長且操作繁復， 容易造成誤差。

因此，亟待開發一可同時針對多重分析物進行分析且操作方便、檢測靈 敏度高的檢測方法。

發明內容

本發明是針對一種多重分析物的檢測方法，可具有提高檢測靈敏度的效 果。

根據本發明的實施例，多重分析物的檢測方法包括以下步驟。提供微米 粒子。微米粒子耦合有至少一種第一配體，且包括本體以及形成于本體的表 面的多個第一突起物。接著，將微米粒子與包括有多種待分析物的樣品混合， 以形成第一復合物。爾后，將第一復合物與帶有多種第一標記的多種第二配 體混合，以使多種第二配體結合至第一復合物中的多種待分析物并形成第二 復合物。最后，對第二復合物中的多種第一標記進行檢測。。

在根據本發明的實施例的檢測方法中，上述的微米粒子為多突狀微粒。 多突狀微粒的本體由內而外包括共聚物核心、高分子層以及硅基層。共聚物 核心的表面形成有多個第二突起物。多個第二突起物的平均高度為100納米 至5000納米。

在根據本發明的實施例的檢測方法中，上述的微米粒子為多突狀磁性微 粒。多突狀磁性微粒的本體由內而外包括共聚物核心、高分子層、磁性物質 層以及硅基層。共聚物核心的表面形成有多個第二突起物。多個第二突起物 的平均高度為100納米至5000納米。

在根據本發明的實施例的檢測方法中，上述的多個第一突起物的平均高 度與本體的平均粒徑的比值為0.005至0.25。

在根據本發明的實施例的檢測方法中，上述的多個第一突起物的平均體 積與本體的平均體積的比值為1x10^-7至2x10^-2。

在根據本發明的實施例的檢測方法中，上述的多個第一突起物的總體積 占所述微米粒子整體體積的10^-1至6x10^-1。

在根據本發明的實施例的檢測方法中，上述的多個第一突起物的平均數 量為5至500。

在根據本發明的實施例的檢測方法中，上述的微米粒子的平均粒徑為1 微米至20微米。

在根據本發明的實施例的檢測方法中，上述的微米粒子為非圓球形。