[發(fā)明專利]雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株及其制備方法、疫苗

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111582307.3
• 申請日: 2021-12-22
• 公開（公告）號: CN114807061A
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳瑞愛;熊挺
• 申請（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/50;C12N15/86;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 王建宇

本發(fā)明公開了一種雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株的構(gòu)建方法，其包括：(1)獲取IBV?Beaudette病毒基因組全長cDNA重組質(zhì)粒；(2)構(gòu)建A21963G沉默突變和G22170C沉默突變的IBV?Beaudette病毒全長cDNA重組質(zhì)粒；(3)轉(zhuǎn)染細胞，拯救獲得的病毒即為雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株。相應(yīng)的，本發(fā)明還公開了一種雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株及疫苗。實施本發(fā)明，可得到具有Vero細胞適應(yīng)性的A21963G和G22170C雙位點沉默點突變的基因標(biāo)記毒株，為IBV基因標(biāo)記疫苗的研制提供參考。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株及其制備方法、疫苗。

背景技術(shù)

雞傳染性支氣管炎(Infectious bronchitis,IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis,IBV)感染引起的一種嚴(yán)重危害家禽養(yǎng)殖業(yè)的高傳染性疾病。IBV主要侵害雞的呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)和消化系統(tǒng)。可造成雛雞腎臟病變和輸卵管永久性退化，從而導(dǎo)致肉雞飼料報酬率降低，蛋雞產(chǎn)蛋率和產(chǎn)蛋質(zhì)量均下降。IBV屬于γ-冠狀病毒，1937年Beaudette等首次分離到該病毒，命名為 Beaudette。IBV是一種單股正鏈RNA病毒，基因組全長約為27.6kb，其5’端和 3’端各有一個非編碼區(qū)(Untranslated region,UTR)3’UTR后具有PolyA尾。IBV 至少有10個明顯的開放閱讀框(ORF)，分別編碼病毒的結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白。現(xiàn)已確定的ORF的定位次序是5’1a-1b-S-3a-3b-E-M-5a-5b-N-3’。其5’端2/3 基因組編碼具有活性的復(fù)制酶，3’端1/3基因組主要編碼結(jié)構(gòu)蛋白，包括纖突蛋白(S)、膜蛋白(M)、核衣殼蛋白(N)和小膜蛋白(E)。其中S蛋白構(gòu)成了IBV的最表層纖狀突起，由S1和S2亞基構(gòu)成，在病毒吸附細胞過程中發(fā)揮作用，決定病毒的組織嗜性，但并不是IBV毒力的唯一決定性因素。S蛋白是最重要的保護性抗原蛋白，其作用表現(xiàn)為刺激機體產(chǎn)生中和抗體。IBV的核酸 (全長mRNA)具有感染性。在輔助蛋白的協(xié)同下能在宿主細胞內(nèi)有效復(fù)制，組裝成病毒顆粒。

標(biāo)記疫苗含有特殊的核酸序列，在疫檢過程中能通過測序準(zhǔn)確區(qū)分受檢動物所攜帶的病毒是來自于疫苗接種還是自然感染，從而能更精準(zhǔn)地配予相應(yīng)防控措施。標(biāo)記疫苗包括基因缺失、基因沉默突變、引入報告基因等。目前報道最多的標(biāo)記疫苗發(fā)明有豬瘟病毒、新城疫和口蹄疫等，其中口蹄疫已有相應(yīng)的標(biāo)記疫苗上市應(yīng)用，但IBV尚未標(biāo)記疫苗相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于，提供一種雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株，其可有效區(qū)分受檢動物所攜帶的病毒是來自于疫苗接種還是自然感染，為 IBV標(biāo)記疫苗提供標(biāo)記位點參考。

本發(fā)明還要解決的技術(shù)問題在于，提供一種雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株的制備方法。

本發(fā)明還要解決的技術(shù)問題在于，提供一種雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株的構(gòu)建方法，其包括：

(1)獲取IBV-Beaudette病毒基因組全長cDNA重組質(zhì)粒；

(2)構(gòu)建A21963G沉默突變和G22170C沉默突變的IBV-Beaudette病毒全長cDNA重組質(zhì)粒；

(3)轉(zhuǎn)染細胞，拯救獲得的病毒即為雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株。

作為上述技術(shù)方案的改進，步驟(1)中，分別獲取pIBVcDNA-1A質(zhì)粒、 pIBVcDNA-2B質(zhì)粒、pIBVcDNA-3C質(zhì)粒、pIBVcDNA-4D質(zhì)粒和pIBVcDNA-5E 質(zhì)粒。