[發明專利]雞傳染性支氣管炎標記疫苗毒株及其制備方法、疫苗

在審

• 申請號: 202111582307.3
• 申請日: 2021-12-22
• 公開（公告）號: CN114807061A
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 陳瑞愛;熊挺
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/50;C12N15/86;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 王建宇

1.一種雞傳染性支氣管炎標記疫苗毒株的構建方法，其特征在于，包括：

(1)構建A21963G沉默突變和G22170C沉默突變的IBV-Beaudette病毒全長cDNA重組質粒；

(2)轉染細胞，拯救獲得的病毒即為雞傳染性支氣管炎標記疫苗毒株。

2.如權利要求1所述的雞傳染性支氣管炎標記疫苗毒株的構建方法，其特征在于，步驟(1)中，分別獲取pIBVcDNA-1A質粒、pIBVcDNA-2B質粒、pIBVcDNA-3C質粒、pIBVcDNA-4D質粒和pIBVcDNA-5E質粒。

3.如權利要求2所述的雞傳染性支氣管炎標記疫苗毒株的構建方法，其特征在于，步驟(2)中，采用核苷酸序列如SEQ ID No.1～10所示的引物，分別構建pIBVcDNA-4X質粒、pIBVcDNA-5Y質粒和pIBVcDNA-6Z質粒，并連接形成A21963G沉默突變和G22170C沉默突變的IBV-Beaudette病毒全長cDNA重組質粒。

4.如權利要求3所述的雞傳染性支氣管炎標記疫苗毒株的構建方法，其特征在于，步驟(2)包括：

(2.1)采用核苷酸序列如SEQ ID No.1～2所示的引物，以pIBCcDNA-4D質粒為模板擴增，然后與質粒載體連接，即得pIBVcDNA-4X質粒；

(2.2)采用核苷酸序列如SEQ ID No.3～8所示的引物，以pIBVcDNA-5E質粒為模板擴增，然后與質粒載體連接，即得pIBVcDNA-5Y質粒；

(2.3)采用核苷酸序列如SEQ ID No.9～10所示的引物，以pIBVcDNA-5E質粒為模板擴增，然后與質粒載體連接，即得pIBVcDNA-6Z質粒；

(2.4)將pIBVcDNA-1A質粒、pIBVcDNA-2B質粒、pIBVcDNA-3C質粒、pIBVcDNA-4X質粒，pIBVcDNA-5Y質粒和pIBVcDNA-6Z質粒連接，形成A21963G沉默突變和G22170C沉默突變的IBV-Beaudette病毒全長cDNA重組質粒。

5.如權利要求4所述的雞傳染性支氣管炎標記疫苗毒株的構建方法，其特征在于，步驟(2.1)和步驟(2.3)中，所述質粒載體為pClone007 Blunt Vector；

步驟(2.2)中，所述質粒載體為T-Vector pMD19。

6.如權利要求4所述的雞傳染性支氣管炎標記疫苗毒株的構建方法，其特征在于，步驟(2.4)中，將pIBVcDNA-1A質粒、pIBVcDNA-2B質粒、pIBVcDNA-3C質粒、pIBVcDNA-4X質粒，pIBVcDNA-5Y質粒和pIBVcDNA-6Z質粒分別采用BsmBI、BsaI、BsaI、BsaI、BsmBI和BsaI酶切，回收片段后連接，形成A21963G沉默突變和G22170C沉默突變的IBV-Beaudette病毒全長cDNA重組質粒。

7.如權利要求4所述的雞傳染性支氣管炎標記疫苗毒株的構建方法，其特征在于，步驟(3)包括：

(3.1)將步驟(2.4)所得的連接產物轉錄；

(3.2)采用轉錄產物轉染細胞，拯救獲得的病毒即為雞傳染性支氣管炎標記疫苗毒株。

8.一種雞傳染性支氣管炎標記疫苗毒株，其特征在于，其由權利要求1～7任一項所述的構建方法構建所得。

9.一種雞傳染性支氣管炎標記疫苗，其特征在于，其包括如權利要求8所述的雞傳染性支氣管炎標記疫苗毒株。