[發(fā)明專利]雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株及其制備方法、疫苗在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202111582307.3 | 申請(qǐng)日： | 2021-12-22 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN114807061A | 公開(kāi)（公告）日： | 2022-07-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陳瑞愛(ài);熊挺 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N7/01 | 分類號(hào)： | C12N7/01;C12N15/50;C12N15/86;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93 |
| 代理公司： | 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202 | 代理人： | 王建宇 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市*** | 國(guó)省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 傳染性 支氣管炎 標(biāo)記 疫苗 及其 制備 方法 | ||
1.一種雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株的構(gòu)建方法，其特征在于，包括：
(1)構(gòu)建A21963G沉默突變和G22170C沉默突變的IBV-Beaudette病毒全長(zhǎng)cDNA重組質(zhì)粒；
(2)轉(zhuǎn)染細(xì)胞，拯救獲得的病毒即為雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株。
2.如權(quán)利要求1所述的雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(1)中，分別獲取pIBVcDNA-1A質(zhì)粒、pIBVcDNA-2B質(zhì)粒、pIBVcDNA-3C質(zhì)粒、pIBVcDNA-4D質(zhì)粒和pIBVcDNA-5E質(zhì)粒。
3.如權(quán)利要求2所述的雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(2)中，采用核苷酸序列如SEQ ID No.1～10所示的引物，分別構(gòu)建pIBVcDNA-4X質(zhì)粒、pIBVcDNA-5Y質(zhì)粒和pIBVcDNA-6Z質(zhì)粒，并連接形成A21963G沉默突變和G22170C沉默突變的IBV-Beaudette病毒全長(zhǎng)cDNA重組質(zhì)粒。
4.如權(quán)利要求3所述的雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(2)包括：
(2.1)采用核苷酸序列如SEQ ID No.1～2所示的引物，以pIBCcDNA-4D質(zhì)粒為模板擴(kuò)增，然后與質(zhì)粒載體連接，即得pIBVcDNA-4X質(zhì)粒；
(2.2)采用核苷酸序列如SEQ ID No.3～8所示的引物，以pIBVcDNA-5E質(zhì)粒為模板擴(kuò)增，然后與質(zhì)粒載體連接，即得pIBVcDNA-5Y質(zhì)粒；
(2.3)采用核苷酸序列如SEQ ID No.9～10所示的引物，以pIBVcDNA-5E質(zhì)粒為模板擴(kuò)增，然后與質(zhì)粒載體連接，即得pIBVcDNA-6Z質(zhì)粒；
(2.4)將pIBVcDNA-1A質(zhì)粒、pIBVcDNA-2B質(zhì)粒、pIBVcDNA-3C質(zhì)粒、pIBVcDNA-4X質(zhì)粒，pIBVcDNA-5Y質(zhì)粒和pIBVcDNA-6Z質(zhì)粒連接，形成A21963G沉默突變和G22170C沉默突變的IBV-Beaudette病毒全長(zhǎng)cDNA重組質(zhì)粒。
5.如權(quán)利要求4所述的雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(2.1)和步驟(2.3)中，所述質(zhì)粒載體為pClone007 Blunt Vector；
步驟(2.2)中，所述質(zhì)粒載體為T(mén)-Vector pMD19。
6.如權(quán)利要求4所述的雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(2.4)中，將pIBVcDNA-1A質(zhì)粒、pIBVcDNA-2B質(zhì)粒、pIBVcDNA-3C質(zhì)粒、pIBVcDNA-4X質(zhì)粒，pIBVcDNA-5Y質(zhì)粒和pIBVcDNA-6Z質(zhì)粒分別采用BsmBI、BsaI、BsaI、BsaI、BsmBI和BsaI酶切，回收片段后連接，形成A21963G沉默突變和G22170C沉默突變的IBV-Beaudette病毒全長(zhǎng)cDNA重組質(zhì)粒。
7.如權(quán)利要求4所述的雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(3)包括：
(3.1)將步驟(2.4)所得的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)錄；
(3.2)采用轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物轉(zhuǎn)染細(xì)胞，拯救獲得的病毒即為雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株。
8.一種雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株，其特征在于，其由權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)所述的構(gòu)建方法構(gòu)建所得。
9.一種雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗，其特征在于，其包括如權(quán)利要求8所述的雞傳染性支氣管炎標(biāo)記疫苗毒株。
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