[發明專利]干細胞無血清培養基及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202111577779.X
• 申請日: 2021-12-22
• 公開（公告）號: CN114214274A
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 鄧世文;雷童;鄭慧婷;陳虹羽;杜宏武
• 申請（專利權）人: 康妍葆（北京）干細胞科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 張金銘

本發明提供了一種干細胞無血清培養基及其制備方法和應用，涉及生物技術領域。本發明提供的干細胞無血清培養基包括基礎培養基和特定濃度的二甲雙胍、胰島素、甘露醇、甘氨酸、聚乙二醇、葡萄糖，經發明人研究發現，二甲雙胍具有提高干細胞增殖的能力，將二甲雙胍與胰島素、甘露醇、甘氨酸、聚乙二醇和葡萄糖配合使用能夠替代血清實現對干細胞的培養，該干細胞無血清培養基組成簡單，安全性高，能夠保持良好的細胞活性和增殖率，提高誘導干細胞的成骨成脂分化能力，有效規避使用血清所存在的問題，能夠應用于干細胞的培養中。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是涉及一種干細胞無血清培養基及其制備方法和應用。

背景技術

間充質干細胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)是一種多能干細胞，具有干細胞的所有共性，即自我復制能力和多向分化能力，可從多種組織中獲得，包括臍帶血、骨髓、脂肪組織、牙周膜、牙髓和牙齦。乳牙牙髓干細胞(stem cells from human exfoliateddeciduous teeth,SHED)屬于外胚間充質干細胞，是一種理想的干細胞來源，通過定向誘導分化，乳牙牙髓干細胞具有在體內和體外分化成骨細胞、肝細胞、肌細胞、神經細胞和皮膚細胞等的能力，在干細胞的治療中有顯著的優勢和良好的應用前景。乳牙牙髓干細胞來源于自然替換的乳牙牙髓，對供體傷害小，無道德倫理問題限制，且移植后致瘤的風險低，同時因其相對缺少免疫源性，培養技術簡單，并可冷凍保存，具有潛在的臨床應用價值，已成為干細胞研究的熱點。

目前所采用的間充質干細胞培養基基本都含有胎牛血清(Foetal Bovine Serum，FBS)，胎牛血清能夠提供細胞在生長過程中貼壁和增殖所必需的激素和生長因子。但是胎牛血清在使用過程中逐漸顯現出其應用的局限性：胎牛血清是從胎牛的血液中獲取的，在提取過程中極有可能有被病原體污染的風險，并且在后續在間充質干細胞的培養過程中有可能將這些傳染源傳播給細胞；細胞的吞噬作用還會使胎牛血清中的蛋白分子細胞內化，無法通過洗滌而清除，而臨床治療通常需要小劑量多次輸注細胞，殘存的異種蛋白直接進入人體會導致機體的免疫排斥反應，從而一定程度上干擾治療效果；同時對產品技術人員及醫務人員(在處理產品時)也存在風險；胎牛血清需要在-20℃下冷藏保存，且存在批次間差異較大等問題。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種干細胞無血清培養基，該培養基組成簡單，能夠有效提高干細胞的增殖能力，以解決上述問題中的至少一種。

本發明的第二目的在于提供一種干細胞無血清培養基的制備方法，該制備方法簡單方便。

本發明的第三目的在于提供一種干細胞無血清培養基在干細胞培養中的應用。

第一方面，本發明提供了一種干細胞無血清培養基，包括基礎培養基和添加組分；

所述添加組分包括二甲雙胍、胰島素、甘露醇、甘氨酸、聚乙二醇和葡萄糖；

所述二甲雙胍的濃度為1-1000μM；

所述胰島素的濃度為10-100μg/mL；

所述甘露醇的濃度為1-5w/v％；

所述甘氨酸的濃度為0.5-1.5w/v％；

所述聚乙二醇的濃度為1-5w/v％；

所述葡萄糖的濃度為1-10w/v％。

作為進一步技術方案，所述二甲雙胍的濃度為1-200μM；

所述胰島素的濃度為10-50μg/mL；

所述甘露醇的濃度為1-3w/v％；

所述甘氨酸的濃度為0.5-1.5w/v％；