[發明專利]干細胞無血清培養基及其制備方法和應用在審
| 申請號： | 202111577779.X | 申請日： | 2021-12-22 |
| 公開（公告）號： | CN114214274A | 公開（公告）日： | 2022-03-22 |
| 發明（設計）人： | 鄧世文;雷童;鄭慧婷;陳虹羽;杜宏武 | 申請（專利權）人： | 康妍葆（北京）干細胞科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 張金銘 |
| 地址： | 102629 北京市大興區中關村科技園*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 干細胞 血清 培養基 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種干細胞無血清培養基，其特征在于，包括基礎培養基和添加組分；
所述添加組分包括二甲雙胍、胰島素、甘露醇、甘氨酸、聚乙二醇和葡萄糖；
所述二甲雙胍的濃度為1-1000μM；
所述胰島素的濃度為10-100μg/mL；
所述甘露醇的濃度為1-5w/v％；
所述甘氨酸的濃度為0.5-1.5w/v％；
所述聚乙二醇的濃度為1-5w/v％；
所述葡萄糖的濃度為1-10w/v％。
2.根據權利要求1所述的干細胞無血清培養基，其特征在于，所述二甲雙胍的濃度為1-200μM；
所述胰島素的濃度為10-50μg/mL；
所述甘露醇的濃度為1-3w/v％；
所述甘氨酸的濃度為0.5-1.5w/v％；
所述聚乙二醇的濃度為1-3w/v％；
所述葡萄糖的濃度為1-5w/v％。
3.根據權利要求2所述的干細胞無血清培養基，其特征在于，所述二甲雙胍的濃度為100μM；
所述胰島素的濃度為10μg/mL；
所述甘露醇的濃度為1w/v％；
所述甘氨酸的濃度為1w/v％；
所述聚乙二醇的濃度為3w/v％；
所述葡萄糖的濃度為1w/v％。
4.根據權利要求1所述的干細胞無血清培養基，其特征在于，所述干細胞包括乳牙牙髓干細胞。
5.根據權利要求1所述的干細胞無血清培養基，其特征在于，所述基礎培養基包括MEM、DMEM、F12或1640，優選為DMEM。
6.根據權利要求1-4任一項所述的干細胞無血清培養基，其特征在于，還包括抗生素；
優選地，所述抗生素包括青霉素-鏈霉素雙抗；
優選地，所述抗生素的濃度為0.5w/v％-1.5w/v％，優選為1w/v％。
7.權利要求1-6任一項所述的干細胞無血清培養基的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
將葡萄糖、甘露醇、甘氨酸和聚乙二醇溶解于基礎培養基中，然后與胰島素溶液和二甲雙胍溶液混合制備得到干細胞無血清培養基；
優選地，所述基礎培養基含有抗生素。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將甘露醇、甘氨酸和聚乙二醇溶解于基礎培養基中后過濾，然后將濾液與過濾后的胰島素溶液和過濾后的二甲雙胍溶液混合制備得到干細胞無血清培養基；
優選地，采用濾膜進行過濾；
優選地，所述濾膜的孔徑為0.1-0.45μm，優選為0.22μm。
9.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述胰島素溶液的溶劑包括5-15mM的鹽酸，優選為10mM的鹽酸；
優選地，所述二甲雙胍溶液的溶劑包括PBS、DMSO、冰醋酸或無水乙醇，優選為PBS。
10.權利要求1-6任一項所述的干細胞無血清培養基，或采用權利要求7-9任一項所述的制備方法制備得到的干細胞無血清培養基在干細胞培養中的應用；
優選地，在干細胞培養至貼壁后，采用所述干細胞無血清培養基培養干細胞。
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