[發明專利]一種柱層析從化橘紅花提取和自動分離揮發油、類黃酮和多糖的方法

在審

• 申請號: 202111575627.6
• 申請日: 2021-12-22
• 公開（公告）號: CN114210096A
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 韓寒冰;黃新敏;何勤勤;劉杰鳳;馬超
• 申請（專利權）人: 廣東石油化工學院
• 主分類號: B01D11/02
• 分類號: B01D11/02;B01D11/04
• 代理公司: 茂名市穗海專利事務所 44106
• 代理人: 高錫珍

本發明提供了一種柱層析從化橘紅花提取和自動分離揮發油、類黃酮和多糖的方法，包括以下步驟：將采集化橘紅新鮮花或收集落花洗凈烘干、粉碎并過篩，先用洗脫液石油醚與花粉末濕潤，濕樣均勻填充到玻璃層析柱中；再利用相似相溶原理，依次采用石油醚、乙醇水溶液、純水洗脫，合并三部分洗脫液，靜置分層，上層含揮發油，下層含有類黃酮和多糖，在下層洗脫液中加入無水乙醇，多糖沉淀，離心分離類黃酮和多糖。本發明可實現不間斷連續提取三大類物質，本發明流程簡單，所用的溶劑量少，提取效率高。

技術領域

本發明涉及天然藥物化學領域，具體涉及到一種柱層析從化橘紅花提取和自動分離揮發油、類黃酮和多糖的方法。

背景技術

化橘紅原植物是蕓香科植物的化州柚，果皮是化痰止咳的名貴中藥，活性成分是揮發油、類黃酮和多糖，化橘紅花的主要黃酮種類及含量與果實的相似，柚皮苷占總黃酮的95%以上，但花中的揮發油與多糖比果實多得多，其獨特的揮發油成分橙花叔醇和法尼醇含量特別高，氣味甜清柔美，香氣持久。化橘紅樹在每年的1~3月開花，花量特別大，尤其是干旱、病蟲害的影響，樹上只見花不見葉，成千成萬朵，掛果的只有幾十到幾百，絕大部分是生理落花或人工疏花，花朵的產量巨大。化橘紅產區有收集落花烘干銷售，但由于普通的烘干或儲存過程中，酶的作用或物質的氧化分解，香味完全失，取而代之的是一種腐味，產品質量大大降低，銷售大受影響，絕大部分花都以廢棄物的形式被丟棄。目前還沒有更有效的加工和儲存方法能夠保持花的芳香氣味，如果能把花中的三類活性物質提取分離出來，特別是把揮發油分離出來，就能最大限度保留揮發油的香氣成分。因此，發明一種簡單易行的能把花中含有的三類活性成分提取并分離開來，對提高化橘紅花的利用和化橘紅產業效益有重要的現實意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種柱層析從化橘紅花提取和自動分離揮發油、類黃酮和多糖的方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

本發明提供的一種柱層析從化橘紅花提取和自動分離揮發油、類黃酮和多糖的方法，該方法包括以下步驟：

（1）采集化橘紅鮮花或收集落花洗凈，置烘箱中105~110℃殺青1~2小時，50～60℃烘干至恒重，粉碎過40～60目篩，得花粉末，備用；

（2）選取直徑為2.0～3.0cm的玻璃層析柱；

（3）將化橘紅花粉末30～50g用石油醚濕樣上柱，并在柱中浸泡1～2小時；

（4）連續添加石油醚使之滲過材料，自上而下流動，浸出有效成分，并收集3～5倍體積量的洗脫液；

（5）轉用體積分數為40～60%乙醇溶液重復步驟（4），收集4～6倍體積量的洗脫液；

（6）轉用純水重復步驟（5），收集6～8倍體積量的洗脫液；

（7）將步驟（4）、（5）和步驟（6）的洗脫液合并，充分混合，萃取分層，上層液中含有揮發油成分，下層液中含有類黃酮和多糖；

（8）將步驟（7）下層液添加無水乙醇，達到體積分數為60～80%乙醇，多糖沉淀，離心，沉淀為粗多糖；

（9）將步驟（7）分別所得上層液和步驟（8）離心上清液減壓濃縮回收石油醚和乙醇，分別得到揮發油和類黃酮的粗產品；

（10）將100～120 mL純水加入到揮發油粗產品中，經水蒸氣蒸餾得到純度較高的精油；

（11）類黃酮的粗產品經大孔吸附樹脂LSA-10吸附分離得到柚皮苷和野漆樹苷；

（12）將步驟（8）粗多糖用三氯乙酸法去除雜質蛋白，得到高純度多糖。

在步驟（4）中，所述收集3～5倍體積量的洗脫液，是指每1g化橘紅花粉末收集洗脫液3～5 mL。

在步驟（5）中，所述收集4～6倍體積量的洗脫液，是指每1g化橘紅花粉末收集洗脫液4～6 mL。

在步驟（6）中，所述收集6～8倍體積量的洗脫液，是指每1g化橘紅花粉末收集洗脫液6～8 mL。