[發明專利]副豬嗜血桿菌無動物源凍干保護劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202111573438.5
• 申請日: 2021-12-21
• 公開（公告）號: CN114381374A
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 蔡旭旺;蔡國華;劉世強;戴昕燕;張迪;馮師帆;林燕;王智超;顧嘉運;徐曉娟
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/20;A61K9/19;A61K47/32;A61K47/26;A61K47/10;A61K39/102;A61P31/04;C12R1/21
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馮超;劉琳

本發明公開了一種副豬嗜血桿菌無動物源凍干保護劑及其制備方法和應用，它的各組分重量百分比為：蔗糖：2％～8％，甘露醇：0.5％～4％，聚乙烯吡咯烷酮：0.25％～3％，右旋糖酐：2％～6％，余量為超純水。該方法將聚乙烯吡咯烷酮和右旋糖酐溶于一部分的水中，高溫滅菌得到溶液A；然后將蔗糖和甘露醇溶于剩余的水中，過濾除菌得到溶液B；最后將溶液A和溶液B混合均勻得到凍干保護劑。本發明的凍干保護劑生產成本較低，且不含動物源成分，降低了不良反應的發生。另外，該保護劑凍干的副豬嗜血桿菌活疫苗，具有良好的耐熱能力和儲存穩定性。

技術領域

本發明涉及微生物保存技術領域，具體涉及一種副豬嗜血桿菌無動物源凍干保護劑及其制備方法和應用。

背景技術

副豬嗜血桿菌作為一種定植于豬上呼吸道的條件性致病菌，可導致豬的多發性漿膜炎、關節炎和腦膜炎，對養豬業造成重大的經濟損失(Brockmeier SL,Loving CL,Mullins MA,Register KB,Nicholson TL,Wiseman BS,Baker RB,Kehrli MEJr.Virulence,transmission,and heterologous protection of four isolates ofHaemophilus parasuis[J].Clin Vaccine Immunol,2013,20:1466–1472)。弱毒活疫苗接種作為傳染病防控的重要手段，其不僅成本相對較低，而且可以刺激機體產生更加全面的免疫應答(Liu H,Xue Q,Zeng Q,Zhao Z.Haemophilus parasuis vaccines[J].VetImmunol Immunopathol,2016,180:53–58)。但是，活疫苗的穩定性相對較差，極大受控于外界條件的影響，很容易在運輸和儲存期間失去保護效力(Price DN,Kunda NK,Ellis R,Muttil P.Design and optimization of a temperature-stable dry powder BCGvaccine[J].Pharm Res,2019,37:11)。因此，穩定性成為活疫苗商品化的重要指標。

冷凍干燥作為一種常用的微生物保存技術，其不僅可以延長制品保存時間，還可以降低運輸成本以及儲存條件要求，被廣泛運用于獸用活疫苗研制(Hansen LJJ,DaoussiR,Vervaet C,Remon JP,De Beer TRM.Freeze-drying of live virus vaccines:Areview[J].Vaccine,2015,33:5507–5519)。然而，凍結和干燥所產生的相關應力往往會導致細胞活性下降甚至死亡，進而影響免疫效果，因此，冷凍干燥過程中需添加合適的凍干保護劑來減少細胞損傷(Friess W,Winter G.Meeting the challenges in freeze-dryingof pharmaceuticals and biologicals[J].Eur J Pharm Biopharm,2013,85:161)。

根據物質性質，凍干保護劑成分可分為糖類、醇類、氨基酸、大分子聚合物等幾種類型，每種類型又包括多種具體物質(Izutsu KI.Applications of freezing andfreeze-drying in pharmaceutical formulations[J].Adv Exp Med Biol,2018,1081:371–383)，例如：

1)糖類包括蔗糖、海藻糖、乳糖等。

2)醇類包括山梨醇、甘露醇、甘油等。

3)氨基酸包括精氨酸、谷氨酸、甘氨酸等。

4)大分子聚合物包括右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、2-羥丙基-β-環糊精等。

由于不同保護劑的保護機制各不相同，單一成分并不能滿足微生物抵抗惡劣環境的需求，凍干保護劑往往需多種成分配伍組合。