[發明專利]副豬嗜血桿菌無動物源凍干保護劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202111573438.5
• 申請日: 2021-12-21
• 公開（公告）號: CN114381374A
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 蔡旭旺;蔡國華;劉世強;戴昕燕;張迪;馮師帆;林燕;王智超;顧嘉運;徐曉娟
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/20;A61K9/19;A61K47/32;A61K47/26;A61K47/10;A61K39/102;A61P31/04;C12R1/21
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馮超;劉琳

1.一種副豬嗜血桿菌無動物源凍干保護劑，其特征在于：所述凍干保護劑的各組分重量百分比為：蔗糖：2％～8％，甘露醇：0.5％～4％，聚乙烯吡咯烷酮：0.25％～3％，右旋糖酐：2％～6％，余量為超純水。

2.根據權利要求1所述副豬嗜血桿菌無動物源凍干保護劑，其特征在于：所述凍干保護劑的各組分重量百分比為：蔗糖：2％～4％，甘露醇：1％～2％，聚乙烯吡咯烷酮：0.25％～1％，右旋糖酐：2％～4％，余量為超純水。

3.根據權利要求1或2所述副豬嗜血桿菌無動物源凍干保護劑，其特征在于：所述凍干保護劑的各組分重量百分比為：蔗糖：2％，甘露醇：2％，聚乙烯吡咯烷酮：0.5％，右旋糖酐：3％和超純水：92.5％。

4.一種權利要求1～3任意一項所述副豬嗜血桿菌無動物源凍干保護劑的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)按上述體積重量比稱取蔗糖、甘露醇、聚乙烯吡咯烷酮、右旋糖酐和超純水；

2)將聚乙烯吡咯烷酮和右旋糖酐溶于一部分的水中，高溫滅菌得到溶液A；

3)將蔗糖和甘露醇溶于剩余的水中，過濾除菌得到溶液B；

4)將溶液A和溶液B混合均勻得到凍干保護劑。

5.根據權利要求4所述副豬嗜血桿菌無動物源凍干保護劑的制備方法，其特征在于：所述步驟2)中，高溫滅菌溫度為110～121℃；時間為10～30min；

所述步驟3)中，過濾除菌的濾膜孔徑為0.22μm。

6.一種權利要求1～2所述的凍干保護劑在制備副豬嗜血桿菌無動物源凍干活疫苗制品中的應用。

7.一種副豬嗜血桿菌無動物源凍干活疫苗制品的制備方法，其特征在于：將權利要求1～3中任意一種所述的凍干保護劑與副豬嗜血桿菌菌液按體積比2～4:1進行混合，凍干得到疫苗制品。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于：所述副豬嗜血桿菌菌液由以下方法培養而成：

1)冷凍保藏的凍干副豬嗜血桿菌種用TSA培養基復蘇活化；

2)將挑取單菌落接種于TSB液體培養基中培養，繼續擴大培養；選取對數末期菌液進行離心再重懸；即得到副豬嗜血桿菌菌液，其中，副豬嗜血桿菌菌液中活菌數為9～15×10⁹CFU/mL。

9.根據權利要求7所述副豬嗜血桿菌無動物源凍干活疫苗制品的制備方法，其特征在于：所述凍干的程序為：

首先將混合物置于溫度為–30℃～–45℃條件下預凍3～4h；然后在真空壓力為0.07～0.15mbar條件下，在溫度為–25℃～0℃范圍內選取多個溫度點梯度逐步升華干燥，總干燥時間為11～16h；再在真空壓力為0.02～0.05mbar條件下，在溫度為10℃～35℃范圍內選取多個溫度點梯度逐步解吸干燥，總干燥時間為7～9h。

10.根據權利要求9所述副豬嗜血桿菌無動物源凍干活疫苗制品的制備方法，其特征在于：所述升華干燥程序如下：

在溫度為–25℃～–20℃條件下干燥2～4h；在溫度為–25℃＜且≤–10℃條件下干燥5～8h，在溫度為–10℃＜且≤0℃條件干燥2～4h；

所述解吸干燥程序如下：

在溫度為10℃～25℃條件下干燥2～4h，在溫度為25℃＜且≤35℃條件下干燥5～7h。