[發(fā)明專利]一種重組合成寵物飼料蛋白及生產(chǎn)工藝

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111567826.2
• 申請日: 2021-12-21
• 公開（公告）號: CN114195877A
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 呂陳峰;周巨川
• 申請（專利權(quán)）人: 青島藍佳生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/75;A23K20/147
• 代理公司: 上海克洛恩知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31436
• 代理人: 王偉珍

本發(fā)明涉及一種重組合成寵物飼料蛋白技術(shù)領(lǐng)域，且公開了一種重組合成寵物飼料蛋白，所述重組合成寵物飼料蛋白序列如SEQ ID1 16.2所示，所述重組合成寵物飼料蛋白的肽鏈片段序列如SEQ ID2 24.5所示。該重組合成寵物飼料蛋白及生產(chǎn)工藝，將蛋白加入到寵物飼料加工過程中代替肉類，使得寵物食品的蛋白質(zhì)成分將具有高達50％的蛋白質(zhì)水平、7％的脂肪水平和35％的碳水化合物，滿足狗和貓的生長和繁殖主要膳食類別的最低蛋白質(zhì)要求，能夠創(chuàng)建氨基酸譜(亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸等)以及來自酵母的強烈鮮味，通過從內(nèi)到外提高寵物食品的適口性食物矩陣，與市場上大多數(shù)顆粒或粗磨產(chǎn)品的表面消化風(fēng)味涂層相比，這種獨特的完全集成的風(fēng)味系統(tǒng)將使寵物食品對寵物更具吸引力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細胞重組飼料技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種重組合成寵物飼料蛋白及生產(chǎn)工藝。

背景技術(shù)

細胞肌肉蛋白是一種合成生物學(xué)實驗技術(shù)，是指將蛋白的遺傳基因植入微生物宿主來合成跟靶蛋白性狀相似的合成蛋白技術(shù)。

現(xiàn)有寵物飼料主要依賴傳統(tǒng)肉類行業(yè)來提供蛋白原料，傳統(tǒng)肉類行業(yè)既是資源密集型的，又對環(huán)境不友好，此外，它使用了近三分之一的農(nóng)業(yè)可用淡水，將富含氮和磷的有機物排放到水道中，導(dǎo)致藻華，利用了全球生產(chǎn)的70％的醫(yī)用抗生素，導(dǎo)致耐藥菌株，預(yù)計到2050年肉類消費量將增加近50％，現(xiàn)有的畜牧業(yè)實踐無法繼續(xù)以可持續(xù)的方式滿足市場需求，故而我們提出一種細胞重組合成蛋白及生產(chǎn)工藝來解決上述問題。

發(fā)明內(nèi)容

(一)解決的技術(shù)問題

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種重組合成寵物飼料蛋白及生產(chǎn)工藝，具備植物合成飼料、高蛋白和無公害等優(yōu)點，解決了現(xiàn)有技術(shù)中采用內(nèi)類生產(chǎn)寵物飼料對環(huán)境和生態(tài)造成危害，肉類消費量急劇增加，現(xiàn)有的畜牧業(yè)實踐無法繼續(xù)以可持續(xù)的方式滿足市場需求的問題。

(二)技術(shù)方案

為實現(xiàn)上述植物合成飼料、高蛋白和無公害目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：重組合成寵物飼料蛋白，所述重組合成寵物飼料蛋白的肌肉蛋白序列如SEQ ID1 16.2所示，所述重組合成寵物飼料蛋白的肽鏈片段序列如SEQ ID224.5所示。

優(yōu)選的，所述重組合成寵物飼料蛋白的分子量如SEQ ID3 20.7和SEQ ID442.2KDa所示，所述肽鏈片通過NdeI和HindIII亞克隆到枯草芽孢桿菌穿梭載體pT7M上。

優(yōu)選的，所述重組合成寵物飼料蛋白生產(chǎn)的宿主為枯草芽孢桿菌7024E細胞，所述重組合成寵物飼料蛋白產(chǎn)生合成蛋白產(chǎn)生單克隆菌落接種后在12.5μg/ml四環(huán)素的LB培養(yǎng)基中37℃搖床200轉(zhuǎn)震蕩培養(yǎng)。

優(yōu)選的，所述光密度達到0.6-0.8后通過添加木糖誘導(dǎo)，培養(yǎng)過程中的溫度控制為25-37℃培養(yǎng)。

一種重組合成寵物飼料蛋白的生產(chǎn)工藝，包括以下步驟：

1)NdeI內(nèi)切酶和HindIII限制性內(nèi)切酶將肌肉蛋白克隆到枯草芽孢桿菌穿梭載體pT7M上；

2)轉(zhuǎn)化枯草芽孢桿菌為7024E細胞，轉(zhuǎn)換之后將合成蛋白產(chǎn)生單克隆菌落接種后在12.5-14μg/ml四環(huán)素的LB培養(yǎng)基中30-37℃溫度下?lián)u床以150-200轉(zhuǎn)震蕩速度培養(yǎng)；

3)當(dāng)培養(yǎng)皿中OD達到0.6-0.8后通過添加2-5％木糖誘導(dǎo)，然后在25-37℃的溫度下培養(yǎng)至細胞離心沉淀；

4)細胞離心沉淀以后用超聲波裂解破壁，溶劑為50mMTris，酸堿度為6-7.5，從而形成可溶性肌肉蛋白。

優(yōu)選的，所述步驟二中枯草芽孢桿菌穿梭載體通過向反應(yīng)皿內(nèi)加入枯草芽孢桿菌形成載體。