[發明專利]一種重組合成寵物飼料蛋白及生產工藝

在審

• 申請號: 202111567826.2
• 申請日: 2021-12-21
• 公開（公告）號: CN114195877A
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 呂陳峰;周巨川
• 申請（專利權）人: 青島藍佳生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/75;A23K20/147
• 代理公司: 上海克洛恩知識產權代理事務所(普通合伙) 31436
• 代理人: 王偉珍

1.一種重組合成寵物飼料蛋白，其特征在于，所述重組合成寵物飼料蛋白的肌肉蛋白序列如SEQ ID1 16.2所示，所述細胞合成蛋白的肽鏈片段序列如SEQ ID2 24.5所示。

2.根據權利要求1所述的一種重組合成寵物飼料蛋白，其特征在于，所述重組合成寵物飼料蛋白的分子量如SEQ ID3 20.7和SEQ ID4 42.2KDa所示，所述肽鏈片通過NdeI和HindIII亞克隆到枯草芽孢桿菌穿梭載體pT7M上。

3.根據權利要求1所述的一種重組合成寵物飼料蛋白，其特征在于，所述重組合成寵物飼料蛋白的宿主為枯草芽孢桿菌7024E細胞，所述重組合成寵物飼料蛋白產生合成蛋白產生單克隆菌落接種后在12.5μg/ml四環素的LB培養基中37℃搖床200轉震蕩培養。

4.根據權利要求1所述的一種重組合成寵物飼料蛋白，其特征在于，所述光密度達到0.6-0.8后通過添加木糖誘導，培養過程中的溫度控制為25-37℃培養。

5.根據權利要求1所述的一種重組合成寵物飼料蛋白，其特征在于，生產過程包括以下重量份數配比的原料：NdeI內切酶0.1-10ppm、HindIII限制性內切酶0.1-10ppm、枯草芽孢桿菌0.1-2％、和木糖2％。

6.一種重組合成寵物飼料蛋白的生產工藝，其特征在于，包括以下步驟：

1)NdeI內切酶和HindIII限制性內切酶克隆肌肉蛋白到枯草芽孢桿菌穿梭載體pT7M上；

2)轉化枯草芽孢桿菌為7024E細胞，轉換之后將合成蛋白產生單克隆菌落接種后在12.5-14μg/ml四環素的LB培養基中30-37℃溫度下搖床以150-200轉震蕩速度培養；

3)當培養皿中OD達到0.6-0.8后通過添加2-5％木糖誘導，然后在25-37℃的溫度下培養至細胞離心沉淀；

4)細胞離心沉淀以后用超聲波裂解破壁，溶劑為50mMTris，酸堿度為6-7.5，從而形成可溶性肌肉蛋白。

7.根據權利要求6所述的一種重組合成寵物飼料蛋白，其特征在于，所述步驟二中枯草芽孢桿菌穿梭載體通過向反應皿內加入枯草芽孢桿菌形成載體。

8.根據權利要求6所述的一種重組合成寵物飼料蛋白，其特征在于，所述步驟三中采用四環素的LB培養基時一般采用15ml-20ml倒一個板子，培養基倒入培養皿后，打開蓋子，在紫外下照10-15分鐘，用封口膠封邊，并倒置放于4℃保存。

9.根據權利要求6所述的一種重組合成寵物飼料蛋白，其特征在于，所述步驟四中細胞離心沉淀過程中將液體沉淀8-10h后取出，將標本離心濃縮后得到可溶性肌肉蛋白，用肌肉蛋白代替肉類進行寵物飼料加工。