[發明專利]一種鈣離子通道阻斷藥物的檢測方法

在審

• 申請號: 202111560143.4
• 申請日: 2021-12-20
• 公開（公告）號: CN114371154A
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 吳寒曦;徐睿航;賈睿;于殿江;魏雙艷;翟玉鳳
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N1/28
• 代理公司: 北京盛凡佳華專利代理事務所(普通合伙) 11947
• 代理人: 李沖

本發明涉及一種鈣離子通道阻斷藥物的檢測方法，包括步驟：S1、Neuro?2a使用高糖HDMEM培養基在六孔板中培養24小時，設立空白、損傷、加藥組；S2、倒掉培養基，加入含GV?58的培養基處理三小時，激活鈣離子通道，細胞內鈣離子濃度上升，建立損傷模型；S3、再加入不同濃度的ω?芋螺毒素GVIA阻斷鈣離子通道使細胞內鈣離子濃度下降；S4、鈣離子熒光探針，處理一小時，PBS沖洗，胰蛋白酶消化2分鐘，收集離心，使用熒光分光光度計檢測480nm激發波長下的發射波長，與空白組比較，計算相對細胞內鈣離子濃度。本發明能夠快速簡易地對細胞內相對鈣離子濃度進行檢測，對鈣離子通道阻斷藥物進行快速評價。

技術領域

本發明涉及鈣離子濃度的檢測方法，特別涉及一種鈣離子通道阻斷藥物的檢測方法。

背景技術

活體細胞不停地進行新陳代謝活動，就必須不斷地與周圍環境進行物質交換，而細胞膜上的離子通道就是這種物質交換的重要途徑。人們已經知道，大多數對生命具有重要意義的物質都是水溶性的，如各種離子，糖類等，它們需要進入細胞，而生命活動中產生的水溶性廢物也要離開細胞，它們出入的通道就是細胞膜上的離子通道。

離子通道由細胞產生的特殊蛋白質構成，它們聚集起來并鑲嵌在細胞膜上，中間形成水分子占據的孔隙，這些孔隙就是水溶性物質快速進出細胞的通道。離子通道的活性，就是細胞通過離子通道的開放和關閉調節相應物質進出細胞速度的能力，對實現細胞各種功能具有重要意義。

鈣離子是最廣泛存在的細胞內信使,調控著幾乎所有生命過程.最近的結構生物學研究解析了很多不同種類的鈣離子通道在不同開放-關閉狀態下的近原子分辨率結構。有關進展揭示了這些通道的分子組成、動態活動、生理功能、調控修飾的分子基礎,為闡明鈣信號轉導和相關疾病的微觀機制提供了理論基礎。

因此對鈣離子通道阻斷劑的作用，在鈣離子濃度層面進行檢測評價，對于藥物研發、機制探索、公共衛生事業具有重要的意義。

發明內容

針對上述背景中的問題，本發明提供了一種鈣離子通道阻斷藥物的檢測方法，其方法簡單，結果準確。

一種鈣離子通道阻斷藥物的檢測方法，包括以下步驟：

S1、Neuro-2a使用高糖HDMEM培養基在六孔板中培養24小時，設立空白、損傷、加藥組；

S2、倒掉HDMEM培養基，加入含GV-58的培養基處理三小時，激活鈣離子通道，細胞內鈣離子濃度上升，建立損傷模型；

S3、再加入不同濃度的ω-芋螺毒素GVIA阻斷鈣離子通道使細胞內鈣離子濃度下降；

S4、鈣離子熒光探針，處理一小時，PBS沖洗，胰蛋白酶消化2分鐘，收集離心，使用熒光分光光度計檢測480nm激發波長下的發射波長，與空白組比較，計算相對細胞內鈣離子濃度。

本發明的有益效果為：

本發明能夠快速簡易地對細胞內相對鈣離子濃度進行檢測，對鈣離子通道阻斷藥物進行快速評價。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發明的某些實施例，因此不應該被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1為Neuro-2a細胞內相對鈣離子濃度柱狀圖。

具體實施方式

下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發明，而不視為限定本發明的范圍，實施例中未注明具體技術或條件者，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件或者按照產品說明書進行。