[發明專利]一種食源性致病菌的免培養高靈敏拉曼檢測方法

在審

• 申請號: 202111544789.3
• 申請日: 2021-12-16
• 公開（公告）號: CN114235777A
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 王盼雪;劉瑩;單錦瑞;李香;李國梁
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 張宇鴿

本發明提供一種食源性致病菌的免培養高靈敏拉曼檢測方法，具體步驟如下：將利用細菌識別元件修飾后的磁珠加入待測樣品中，得到磁珠/食源性致病菌復合物；向磁珠/食源性致病菌復合物中加入細菌識別元件修飾后的低生物背景信號放大型拉曼探針，得到磁珠/食源性致病菌/低生物背景拉曼探針復合物；向磁珠/食源性致病菌/低生物背景拉曼探針復合物中加入拉曼探針裂解液，得到拉曼報告物溶液，將拉曼報告物溶液與拉曼光譜增強基底混合，采集混合液的表面增強拉曼光譜，根據光譜中報告物的信號強度計算待測樣品中食源性致病菌的含量，本發明的檢測方法避免了食品基質對拉曼檢測的干擾，提高了方法的特異性和靈敏度，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬于食品安全檢測技術領域，具體屬于一種食源性致病菌的免培養高靈敏拉曼檢測方法。

背景技術

食源性致病菌污染是引起我國食品安全問題的重要因素。食源性致病菌的快速檢測方法和技術，是預防和控制食源性疾病爆發的技術關鍵，也是保障食品安全的重要技術支撐。然而現有的食源性致病菌檢測方法存在依賴増菌、操作步驟繁瑣、對檢測人員專業素質要求高等局限性，很難滿足食品行業自檢及食品安全部門監管的需求。因此，亟需構建一種操作簡便、靈敏度高、用時短的食源性致病菌檢測方法。

表面增強拉曼光譜(SERS)技術是一種強有力的光學檢測技術，具有樣品前處理簡單、響應速度快、指紋識別、半峰寬窄、操作簡便、可用于現場檢測等優點，在食源性致病菌檢測中備受關注。而且，隨著便攜式拉曼光譜儀性能的不斷提升，SERS技術在食源性致病菌現場檢測中的潛力被不斷發掘，該技術無需昂貴的設備和專業的測試人員，真正實現了食源性致病菌的簡便、快速檢測。然而，由于食品基質復雜，其中致病菌的種類多樣、含量很低，SERS基底或SERS標簽結合食源性致病菌的選擇性差，現有SERS方法在食源性致病菌檢測中存在易受干擾、特異性差、靈敏度低的瓶頸問題。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明提供一種食源性致病菌的免培養高靈敏拉曼檢測方法，采用了低生物背景干擾的信號放大型拉曼探針，探針的特異性強、單色性好，避免了食品基質對拉曼檢測的干擾，大大提高了方法的特異性；同時拉曼探針具有信號放大效果，有效提高了方法的靈敏度，具有良好的應用前景。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種食源性致病菌的免培養高靈敏拉曼檢測方法，具體步驟如下：

S1將利用細菌識別元件修飾后的磁珠加入待測樣品中，得到磁珠/食源性致病菌復合物；

S2向磁珠/食源性致病菌復合物中加入細菌識別元件修飾后的低生物背景信號放大型拉曼探針，得到磁珠/食源性致病菌/低生物背景拉曼探針復合物；

S3向磁珠/食源性致病菌/低生物背景拉曼探針復合物中加入拉曼探針裂解液，得到拉曼報告物溶液，將拉曼報告物溶液與拉曼光譜增強基底混合，采集混合液的表面增強拉曼光譜，根據光譜中報告物的信號強度計算待測樣品中食源性致病菌的含量。

進一步的，步驟S1中，所述修飾磁珠的細菌識別元件為抗菌肽。

進一步的，步驟S1中，所述磁珠與待測樣品的體積比為1:1～1:3，在室溫下反應30min～60min。

進一步的，步驟S2中，所述低生物背景信號放大型拉曼探針由載體和拉曼報告物構建得到，其中所述載體為三維金屬有機框架材料，平均粒徑≤200nm；所述拉曼報告物為含有炔基和苯環結構的化合物。

進一步的，步驟S2中，所述修飾低生物背景信號放大型拉曼探針的細菌識別元件為單克隆抗體和多克隆抗體。

進一步的，步驟S2中，步驟S1得到的磁珠/食源性致病菌復合物與500μL～1000μL濃度為5mg/mL低生物背景信號放大型拉曼探針混合后在室溫下反應30min～60min。

進一步的，步驟S3中，所述拉曼探針裂解液為1M氫氧化鈉溶液，用量為100μL～200μL。