[發(fā)明專利]一種食源性致病菌的免培養(yǎng)高靈敏拉曼檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111544789.3
• 申請(qǐng)日: 2021-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN114235777A
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王盼雪;劉瑩;單錦瑞;李香;李國梁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西科技大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/65
• 分類號(hào): G01N21/65
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 張宇鴿

1.一種食源性致病菌的免培養(yǎng)高靈敏拉曼檢測(cè)方法，其特征在于，具體步驟如下：

S1將利用細(xì)菌識(shí)別元件修飾后的磁珠加入待測(cè)樣品中，得到磁珠/食源性致病菌復(fù)合物；

S2向磁珠/食源性致病菌復(fù)合物中加入細(xì)菌識(shí)別元件修飾后的低生物背景信號(hào)放大型拉曼探針，得到磁珠/食源性致病菌/低生物背景拉曼探針復(fù)合物；

S3向磁珠/食源性致病菌/低生物背景拉曼探針復(fù)合物中加入拉曼探針裂解液，得到拉曼報(bào)告物溶液，將拉曼報(bào)告物溶液與拉曼光譜增強(qiáng)基底混合，采集混合液的表面增強(qiáng)拉曼光譜，根據(jù)光譜中報(bào)告物的信號(hào)強(qiáng)度計(jì)算待測(cè)樣品中食源性致病菌的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種食源性致病菌的免培養(yǎng)高靈敏拉曼檢測(cè)方法，其特征在于，步驟S1中，所述修飾磁珠的細(xì)菌識(shí)別元件為抗菌肽。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種食源性致病菌的免培養(yǎng)高靈敏拉曼檢測(cè)方法，其特征在于，步驟S1中，所述磁珠與待測(cè)樣品的體積比為1:1～1:3，在室溫下反應(yīng)30min～60min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種食源性致病菌的免培養(yǎng)高靈敏拉曼檢測(cè)方法，其特征在于，步驟S2中，所述低生物背景信號(hào)放大型拉曼探針由載體和拉曼報(bào)告物構(gòu)建得到，其中所述載體為三維金屬有機(jī)框架材料，平均粒徑≤200nm；所述拉曼報(bào)告物為含有炔基和苯環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種食源性致病菌的免培養(yǎng)高靈敏拉曼檢測(cè)方法，其特征在于，步驟S2中，所述修飾低生物背景信號(hào)放大型拉曼探針的細(xì)菌識(shí)別元件為單克隆抗體和多克隆抗體。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種食源性致病菌的免培養(yǎng)高靈敏拉曼檢測(cè)方法，其特征在于，步驟S2中，步驟S1得到的磁珠/食源性致病菌復(fù)合物與500μL～1000μL濃度為5mg/mL低生物背景信號(hào)放大型拉曼探針混合后在室溫下反應(yīng)30min～60min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種食源性致病菌的免培養(yǎng)高靈敏拉曼檢測(cè)方法，其特征在于，步驟S3中，所述拉曼探針裂解液為1M氫氧化鈉溶液，用量為100μL～200μL。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種食源性致病菌的免培養(yǎng)高靈敏拉曼檢測(cè)方法，其特征在于，步驟S3中，按照體積比1:3～2:1向拉曼報(bào)告物溶液中加入拉曼光譜增強(qiáng)基底，在室溫下反應(yīng)5min～30min后，采集混合液的表面增強(qiáng)拉曼光譜。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種食源性致病菌的免培養(yǎng)高靈敏拉曼檢測(cè)方法，其特征在于，步驟S3中，所述拉曼光譜增強(qiáng)基底為液態(tài)增強(qiáng)基底。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種食源性致病菌的免培養(yǎng)高靈敏拉曼檢測(cè)方法，其特征在于，步驟S3中，使用便攜式拉曼光譜儀采集混合液的表面增強(qiáng)拉曼光譜，檢測(cè)條件為：激光波長785nm，功率160mW～320mW，曝光時(shí)間3s～6s，拉曼位移300cm^-1～3100cm^-1。