[發(fā)明專利]一種紫點海葵多肽毒素Hc-GQ及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111540613.0
• 申請日: 2021-12-16
• 公開（公告）號: CN114262370B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高炳淼;廖燕玲;符金星;李明;郭琦琦
• 申請（專利權(quán)）人: 海南醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04;A01N37/46;A01P7/04
• 代理公司: 海南漢普知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 46003
• 代理人: 劉建芳

1.一種紫點海葵多肽毒素Hc-GQ，其特征在于，其序列為KCQCSACGAETSLCNFTSGACLCK，具有6個半胱氨酸形成3個二硫鍵，二硫鍵方式為C1-C6，C2-C5，C3-C4。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫點海葵多肽毒素Hc-GQ的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）稱取2-cl樹脂加入反應(yīng)器中用DCM浸泡，然后用DMF洗滌，再用DCM洗滌，加入Fmoc-Lys（tbu）-OH、DCM和DIEA進(jìn)行反應(yīng)，后補(bǔ)加甲醇和DCM，封閉反應(yīng)；

（2）將步驟1得到的樹脂產(chǎn)物抽干溶劑，用DMF洗滌，加入含哌啶的DMF溶液脫除Fmoc，抽干后用DMF洗滌，取樹脂加入檢測管中，采用茚三酮乙醇溶液和吡啶檢測，顯色即可；

（3）稱取下一個氨基酸Fmoc-Cys-OH和HOBT加入反應(yīng)器中，倒入DMF，再加入DIC反應(yīng)；

（4）將步驟3得到的樹脂產(chǎn)物抽干溶劑，用DMF洗滌，加入含哌啶的DMF溶液脫除Fmoc，抽干后用DMF洗滌，取樹脂加入檢測管中，采用茚三酮乙醇溶液和吡啶檢測，顯色即可；

（5）按照紫點海葵多肽毒素Hc-GQ的序列稱取不同氨基酸重復(fù)步驟（3）和（4），直到肽鏈結(jié)束；

（6）用甲醇沖洗步驟5得到的樹脂，抽干，倒入離心管中，加切割液切割，過濾掉樹脂，濾液中加入冰乙醚析出產(chǎn)物，離心去掉上層乙醚，得到粗品多肽，即線性肽Hc-GQ；

（7）用HPLC分離純化粗品多肽，得到純品多肽，即純品線性肽Hc-GQ；

（8）稱取步驟（7）得到的純品線性肽Hc-GQ制成水溶液，加入NH₄HCO₃攪拌，利用空氣氧化法對合成的線性肽Hc-GQ進(jìn)行法氧化折疊，取樣用HPLC觀察動態(tài)氧化折疊過程并對其純化得到純品，獲得紫點海葵多肽毒素Hc-GQ。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫點海葵多肽毒素Hc-GQ的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，加入0.6~1.0mmol?Fmoc-Lys（tbu）-OH、10~15mL?DCM和1~3mL?DIEA進(jìn)行反應(yīng)80~100min，后再加3~5mL甲醇和8~12mL?DCM，封閉反應(yīng)25~35min。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫點海葵多肽毒素Hc-GQ的制備方法，其特征在于，步驟（2）和步驟（4）中，采用含哌啶質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的DMF溶液脫除Fmoc，15~25min。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫點海葵多肽毒素Hc-GQ的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，稱取1.5~2.0mmol氨基酸?和1.5~2.0mmol?HOBT加入反應(yīng)器中，倒入5~15mL?DMF，再加入1~3mL?DIC反應(yīng)0.5~1.5h。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫點海葵多肽毒素Hc-GQ的制備方法，其特征在于，步驟（2）和步驟（4）中，采用茚三酮濃度為5g/100mL的乙醇溶液2滴、吡啶2滴，100℃加熱2min檢測樹脂。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫點海葵多肽毒素Hc-GQ的制備方法，其特征在于，步驟（6）中，切割液為95wt%TFA、1wt%H₂0、2wt%EDT和2wt%?TIS。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫點海葵多肽毒素Hc-GQ的制備方法，其特征在于，步驟（7）中，用HPLC分離純化粗品多肽，線性肽Hc-GQ的洗脫時間為21.8min，得到純品多肽，即純品線性肽Hc-GQ。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫點海葵多肽毒素Hc-GQ的制備方法，其特征在于，步驟（8）中，采用制備型HPLC對氧化72h后的Hc-GQ進(jìn)行分離純化，純化后再利用分析型HPLC進(jìn)行分析，氧化肽Hc-GQ的洗脫時間為19.4min，即獲得紫點海葵多肽毒素Hc-GQ。

10.權(quán)利要求1所述的紫點海葵多肽毒素Hc-GQ在制備殺蟲劑中的應(yīng)用，所述蟲為黃粉蟲。