[發(fā)明專利]miRNA-140的應用及調(diào)控斑馬魚顱面骨骼和鱗片發(fā)育的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202111535585.3 | 申請日： | 2021-12-15 |
| 公開（公告）號： | CN115851828A | 公開（公告）日： | 2023-03-28 |
| 發(fā)明（設計）人： | 許強華;陳良標;張智聰;季馮鈺 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海海洋大學 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/113;C12N15/55;C12N15/11;C12Q1/6888;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海唯智贏專利代理事務所(普通合伙) 31293 | 代理人： | 吳瑾瑜 |
| 地址： | 201306 上海市*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | mirna 140 應用 調(diào)控 斑馬 魚顱面 骨骼 鱗片 發(fā)育 方法 | ||
1.miRNA-140在調(diào)控斑馬魚顱面骨發(fā)育或鱗片發(fā)育方面的應用。
2.調(diào)控斑馬魚顱面骨發(fā)育或鱗片發(fā)育的方法，其特征在于，敲除斑馬魚的miRNA-140基因、降低miRNA-140基因的表達或者增強miRNA-140基因的表達。
3.構(gòu)建顱面和鱗片發(fā)育異常的斑馬魚模型的方法，其特征在于，敲除斑馬魚的miRNA-140基因。
4.根據(jù)權(quán)利要求4所述構(gòu)建顱面和鱗片發(fā)育異常的斑馬魚模型的方法，其特征在于，步驟包括：
(1)敲除斑馬魚的一細胞期受精卵中的miRNA-40基因，獲得miR-140基因敲除的斑馬魚雜合子F0代；
(2)將F0代與AB型野生斑馬魚雜交獲得F1代，經(jīng)基因測序，獲得miR-140基因缺失的雜合子；
(3)將成熟F1代miR-140基因缺失型雌、雄雜合子進行內(nèi)交得F2代，獲得F2代miR-140基因缺失的雌雄性純合子斑馬魚。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述構(gòu)建顱面和鱗片發(fā)育異常的斑馬魚模型的方法，其特征在于，還包括步驟(4)：將F2代miR-140基因缺失的雌雄性純合子斑馬魚交配產(chǎn)生F3代，純合子斑馬魚。
6.敲除斑馬魚miRNA-140基因的方法，其特征在于，敲除SEQ ID No.1中第217-513長度為297bp的核苷酸序列，包括以下步驟：將Cas9和上下游gRNA注射入斑馬魚的一細胞期受精卵。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述敲除斑馬魚miRNA-140基因的方法，其特征在于，所述上下游gRNA通過以下步驟制備：
(A)以如SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示的寡核苷酸序列、sgRNA骨架序列為模板，擴增獲得gRNA體外轉(zhuǎn)錄模板；
(B)根據(jù)gRNA體外轉(zhuǎn)錄模板，進行T7啟動子的體外轉(zhuǎn)錄，獲得上下游gRNA。
8.用于鑒定斑馬魚miRNA-140基因表型的引物，其特征在于，上下游引物序列如SEQ IDNo.4和SEQ ID No.5所示。
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