[發明專利]一種微生物防治三七根腐病劑的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 202111533266.9
• 申請日: 2021-12-15
• 公開（公告）號: CN114250176B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 李一青;胡林芳;苗翠蘋
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/28;A01P3/00;C12R1/465
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本發明涉及一種微生物防治三七根腐病劑的制備方法及其應用，屬于微生物農藥技術領域。本發明的微生物防治三七根腐病劑，由保藏號為CCTCC?NO：M?2018221的一株鏈霉菌(Streptomyces?sp.)YIM?PH20246經過二次發酵方法制備得到。本發明的微生物防治三七根腐病劑對三七根腐病原真菌尖孢鐮刀菌、腐皮鐮刀菌及黃瓜萎蔫病菌均有較好的離體抑制活性，具有易重復生產，經濟安全、綠色環保的優點，在三七根腐病的生物防治中具有潛在和實際的應用價值。

技術領域

本發明涉及一種微生物防治三七根腐病劑的制備方法及其應用，屬微生物農藥技術領域。

背景技術

三七根腐病是典型的土傳病害，土壤帶菌是引發三七根腐病的重要因素，可導致根腐病的病原菌有真菌、細菌、線蟲三大類，病原可單獨致病或復合侵染，其中，腐皮鐮孢菌、尖孢鐮孢菌及草莖點霉菌等真菌是田間三七根腐病的主要致病菌。目前對三七根腐病的防治很大程度上還是依賴于使用有機氯、有機磷以及氨基甲酸酯等化學農藥進行藥劑灌根，由于農藥的大量使用所導致的三七農藥殘留已嚴重地影響了三七的品質和藥用價值。通過大量篩選和利用拮抗三七根腐病的有益微生物進行三七根腐病害的生物防治，具有經濟安全、綠色環保的優勢，是三七根腐病防治中重要而有效的途徑。

放線菌是農用抗生素的重要產生菌，70％以上的農用抗生素由放線菌產生，鏈霉菌作為放線菌中的優勢菌群，無論是分離自普通環境還是特殊生境的鏈霉菌，均能產生各種抗菌(真菌、細菌)生物活性物質。在植物病害的生物防治中起著非常重要的作用。在前期研究中，發明人篩選得到一株鏈霉菌，其發酵液具有較好拮抗三七根腐病原真菌活性，在三七根腐病的生物防治中具有潛在和實際的應用價值。

發明內容

本發明的目的是通過對一株鏈霉菌YIM?PH20246菌株進行發酵研究，制備微生物防治三七根腐病劑。

本發明是這樣實現的：

發明人在前期研究中，篩選得到一株具有抑制三七根腐病活性的鏈霉菌YIMPH20246(Streptomyces?sp.YIM?PH20246)，該菌株已于2018年4月19日保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：中國武漢市武漢大學，保藏號為CCTCC?NO：M?2018221。

本發明的微生物防治三七根腐病劑的制備方法包括以下步驟：

(1)試管種培養：將保藏號為CCTCC?NO：M2018221的鏈霉菌YIM?PH20246(Streptomyces?sp.YIM?PH20246)菌株接種到試管固體培養基斜面上，于28℃的溫度下培養6天，獲得菌株試管種。

其中，固體培養基配方為：酵母粉4.0g；葡萄糖4.0g；麥芽膏5.0g；復合維生素3.5mg；瓊脂粉15.0g；水1000mL；pH?7.2。

(2)培養液體種子：采用500mL三角瓶搖瓶培養，先配制液體種子培養基，在每個三角瓶中裝入100mL液體培養基，于120℃的溫度下滅菌30分鐘，冷卻后接入1cm²大的菌株試管種，于28℃的溫度下于轉速為220rpm的搖床上培養2天，獲得液體種子。

其中，液體種子培養基配方為酵母粉4.0g；葡萄糖4.0g；麥芽膏5.0g；復合維生素3.5mg；水1000mL；pH?7.2。

(3)制備微生物防治三七根腐病劑：采用1000mL三角瓶搖瓶培養，先配制液體發酵培養基，在每個三角瓶中裝入200mL液體發酵培養基，于120℃的溫度下滅菌30分鐘，冷卻后接入20mL上述步驟(2)中獲得的液體種子，在28℃的溫度下于轉速為220rpm的搖床上培養6天后獲得菌株發酵產物，在發酵產物中加入等體積乙醇，經轉速為180rpm的搖床振蕩6小時后濾去菌絲體，蒸干上清液中的乙醇得到菌株發酵提取物，將該發酵提取物加水稀釋到原發酵液濃度，即為試驗用微生物防治三七根腐病劑。