[發明專利]一種人神經干細胞制劑及其制備方法

有效

• 申請號: 202111514134.1
• 申請日: 2021-12-13
• 公開（公告）號: CN114099548B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 謝再東;王軍霞;潘春雷;吳鋒;殷鑒強;劉定生;朱建榮
• 申請（專利權）人: 領航干細胞再生醫學工程有限公司
• 主分類號: A61K35/30
• 分類號: A61K35/30;A61K9/08;C12N5/0797;A61K47/08;A61K47/26;A61K47/42;A61P25/28;A61P9/10;A61P25/00;A61P25/08;A61P25/16;A61P25/14;A61P21/00
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本發明公開了一種人神經干細胞制劑及其制備方法,人神經干細胞制劑由神經干細胞和基質溶液組成，基質溶液由右旋糖酐40葡萄糖注射液，10?15%人血白蛋白，0.1?0.5ug/ml胞二磷膽堿鈉注射液,20?50ug/ml神經節苷脂鈉，1?10?uM輔酶Q10構成。制劑中干細胞是人胚胎干細胞經體外誘導、擴增獲得的高純度、高活性的神經干細胞，由神經干細胞和基質溶液制備成的神經干細胞制劑能夠很好的維持神經干細胞的活性、干性和均一性，本發明成分明確，不含異源動物血清，在4?8℃保存48?h后，細胞形態均一，存活率保持在90%以上，神經干細胞特異性表面標志Nestin呈陽性，具有形成神經球和分化成神經元的特性。

技術領域

本發明涉及一種人神經干細胞制劑及其制備方法，具體為干細胞培養技術領域。

背景技術

神經退行性疾病是目前臨床上比較常見的神經系統疾病，主要是由神經元和（或）其髓鞘的喪失所致，隨著時間的推移而惡化，出現功能障礙。它主要包括腦缺血（CI）、腦損傷（BI）、癲癇；阿爾茨海默病（AD）、帕金森病（PD）、亨廷頓病（HD）、肌萎縮性側索硬化（ALS）等疾病。中樞神經系統受損后很難修復、再生，主要原因是：①神經元等神經細胞是高度分化的終末細胞，本身的再生能力較小；②神經營養因子分泌不足，局部微環境不利于受損神經系統修復；③損傷后，機體分泌炎癥因子和多種細胞因子，抑制了突觸再生并加重缺血缺氧發生；④損傷部位疤痕的形成，對神經再生具有物理和化學屏障作用，增加了神經突觸延伸生長的難度。

目前的治療有藥物治療、運動療法及細胞療法。藥物一般為神經保護作用的藥物，療效有限；運動療法對運動能力嚴重喪失的患者具有限制性；相比之下，神經干細胞的移植可能是最為有效的方式之一。神經干細胞是一類具有自我更新能力，并在特定微環境下分化成神經元、星形膠質細胞和少突膠質細胞的多潛能干細胞。神經干細胞在移植修復中能夠分化成神經元或神經膠質細胞，替代損傷死去的細胞，表達多種神經營養因子，改善細胞微環境，抑制膠質細胞過度增生等作用。

神經干細胞主要來源于胎腦組織或人胚胎干細胞定向分化或誘導多能干細胞（iPSC)定向分化。胎腦組織來源有限和倫理問題限制其在臨床上的大規模應用。IPSC由于外源基因的嵌入，其臨床應用的安全性有待進一步的研究。因此ESC作為原材料定性誘導神經干細胞為臨床治療提供新思路，大大拓展了神經干細胞在臨床醫學的應用潛力，已有臨床研究顯示人胚胎干細胞源的神經前體細胞治療帕金森病安全有效。

?神經干細胞作為臨床細胞移植治療的關鍵成分，細胞的活性、干性和均一性對發揮治療效果尤其重要。生理鹽水、葡萄糖注射液等單一成分作為細胞的輸注介質，由于營養單一和緩沖能力差，細胞活性在12?h內下降至90%以下，細胞的分化、再生能力不足，均一性不穩定，導致臨床研究應用存在安全隱患和療效不佳。因此發明一種成分明確，臨床輸注安全，有效長時間維持輸注干細胞的活性、干性和均一性的制劑就成為了臨床治療亟需解決的問題。

人血白蛋白為細胞提供營養，維持細胞活性，同時可以增強單個細胞的穩定性，避免聚團，防止回輸過程引起栓塞。

胞二磷膽堿為核苷衍生物，可改善神經類細胞功能的恢復，對促進大腦功能恢復有一定作用，在腦缺血狀態下，可被吸收到神經細胞膜，促進磷脂質的生物合成和改善磷脂質代謝，提高細胞體外和體內移植時的細胞活性和干性。

右旋糖酐40葡萄糖注射液：血容量擴充劑，靜注后能提高血漿膠體滲透壓，吸收血管外水分而增加血容量，升高和維持血壓。它可使已經聚集的紅細胞和血小板解聚，降低血液粘滯性，改善微循環，防止血栓形成；葡萄糖是活細胞的能量來源和新陳代謝中間產物，即生物的主要供能物質。

神經節苷脂鈉能促進由于各種原因引起的中樞神經系統損傷的功能恢復。作用機理是促進“神經重構neuroplasticity”（包括神經細胞的生存、軸突生長和突觸生長）。對神經細胞有保護作用，提高神經細胞的活性和神經分化能力。