[發明專利]一種黃瓜耐寒基因LTT緊密連鎖的SNP分子標記及其應用有效
| 申請號： | 202111512071.6 | 申請日： | 2021-12-07 |
| 公開（公告）號： | CN114015803B | 公開（公告）日： | 2023-07-21 |
| 發明（設計）人： | 顧興芳;張圣平;苗晗;李彩霞;董邵云;劉小萍 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院蔬菜花卉研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 薛紅凡 |
| 地址： | 100081 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 黃瓜 耐寒 基因 ltt 緊密 連鎖 snp 分子 標記 及其 應用 | ||
1.一種黃瓜耐寒基因LTT緊密連鎖的SNP分子標記，其特征在于，所述SNP分子標記的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，所述SEQ?ID?NO：1的第45位堿基存在C/G多態性；
所述耐寒黃瓜的生長溫度為不低于15℃。
2.一種擴增權利要求1所述SNP分子標記的引物在耐寒黃瓜品種選育中的應用，所述引物包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示的反向引物；
所述耐寒黃瓜的生長溫度為不低于15℃。
3.一種擴增權利要求1所述SNP分子標記的引物在鑒定或篩選耐寒黃瓜中的應用，所述引物包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示的反向引物；
所述耐寒黃瓜的生長溫度為不低于15℃。
4.一種篩選耐寒黃瓜品種的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)提取待測樣品基因組DNA；
2)以所述待測樣品基因組DNA為模板，以引物進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；
所述引物包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示的反向引物；
3)檢測所述PCR擴增產物的第45位堿基，當堿基為C時，說明待測樣品屬于耐寒黃瓜品種，當堿基為G時，說明待測樣品屬于溫度敏感黃瓜品種；所述耐寒黃瓜的生長溫度為不低于15℃。
5.根據權利要求4所述篩選耐寒黃瓜品種的方法，其特征在于，步驟3)中所述檢測所述PCR擴增產物的第45位堿基的方法包括測序或HinfI酶切。
6.根據權利要求5所述篩選耐寒黃瓜品種的方法，其特征在于，所述Hinf?I酶切的體系為PCR產物2μl，內切酶0.3μl，Cutsmart?1μl，ddH2O?6.7μl；
所述HinfI酶切的溫度為37℃，酶切時間為3h；
所述HinfI酶切后，當獲得一條195bp的酶切片段時，45位堿基為C，說明待測樣品為耐寒黃瓜品種；當獲得一條236bp的片段時，45位堿基為G，說明待測樣品屬于溫度敏感黃瓜品種。
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