[發(fā)明專利]一種Eze-ECM水凝膠的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111507900.1
• 申請日: 2021-12-10
• 公開（公告）號: CN114159470A
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳剛
• 申請（專利權(quán)）人: 陳剛
• 主分類號: A61K35/38
• 分類號: A61K35/38;A61K31/397;A61K9/00;A61P25/28;C12N5/071
• 代理公司: 武漢菲翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42284
• 代理人: 劉谷紅

本發(fā)明公開了一種Eze?ECM水凝膠的制備方法，具體包括如下步驟：A.準(zhǔn)備工作；B.豬小腸預(yù)處理；C.脫細(xì)胞處理；D.凝膠化處理；E.制備Eze?ECM水凝膠。本發(fā)明主要通過提供一種ECM水凝膠的制備方法，使ECM水凝膠能夠符合Eze的負(fù)載結(jié)構(gòu)，形成具有穩(wěn)定三維結(jié)構(gòu)的ECM水凝膠，后續(xù)能夠形成直接注射治療，相較于如今的脊髓內(nèi)神經(jīng)信號網(wǎng)絡(luò)的重建治療方案，如口服藥和區(qū)域注射，本方法的脊髓腔更具有先進性和突破性，可進一步促進損傷區(qū)域的恢復(fù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)療藥物制備工藝，特別涉及一種Eze-ECM水凝膠的制備方法。

背景技術(shù)

脊髓損傷后藥物的使用具有局限性。一方面，口服藥物不易透過血-脊髓屏障，且具有存留時間過短、代謝速率過快的缺點，導(dǎo)致其在應(yīng)用時出現(xiàn)瓶頸；另一方面，傳統(tǒng)局部注射藥物無法在脊髓損傷指定部位釋放。因此，新型載藥方式的研究，對于脊髓損傷后的神經(jīng)再生與功能修復(fù)至關(guān)重要。

依折麥布(Eze)是一種新型的選擇性膽固醇吸收抑制劑，可通過抑制NPC1L1降低膽固醇水平而改善高血脂癥，據(jù)報道，Eze與辛伐他汀聯(lián)用能夠改善大鼠脊髓損傷后的神經(jīng)功能，減輕內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)，其它相關(guān)研究和論文也說明了，Eze能夠顯著降低脊髓損傷急性期細(xì)胞凋亡，促進神經(jīng)元損傷的修復(fù)，改善脊髓損傷后大鼠的運動功能恢復(fù)。

在現(xiàn)有技術(shù)中，由于ECM具有強大的促進再生的能力，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、成熟以及損傷修復(fù)的過程中起著重要的調(diào)控作用，從而在結(jié)合Eze和ECM后即可得到具有強修復(fù)作用的Eze-ECM水凝膠，然而結(jié)合過程中依舊需要具有穩(wěn)定三維結(jié)構(gòu)的ECM水凝膠并在此基礎(chǔ)上負(fù)載Eze，否則無法達(dá)到最佳的治療效果，因此制備合格的Eze-ECM水凝膠是如今脊髓損傷后藥物的使用趨勢。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種Eze-ECM水凝膠的制備方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

本發(fā)明一種Eze-ECM水凝膠的制備方法，具體包括如下步驟：

A.準(zhǔn)備工作，將刮腸機和操作臺殺菌消毒，豬小腸放置于恒溫箱保存，將0.1％的過氧乙酸溶液，PBS緩沖液，0.1M鹽酸-胃蛋白酶液，0.1M氫氧化鈉均放置于陰涼處存放；

B.豬小腸預(yù)處理，以豬小腸為原料，通過刮腸機刮去豬小腸的漿膜層、肌層和粘膜層，留置小腸粘膜下層及粘膜固有層；

C.脫細(xì)胞處理，將步驟B中留置的小腸粘膜下層及粘膜固有層均放置于0.1％的過氧乙酸溶液中浸泡1.5～2.5h，并采用PBS緩沖液清洗瀝干水分，隨后放置于低溫箱中低溫冷凍干燥，初步獲得ECM粉末；

D.凝膠化處理，將步驟C中ECM粉末溶解于0.1M鹽酸-胃蛋白酶液中，在室溫狀態(tài)下攪拌消化46h～50h，采用0.1M氫氧化鈉滴定溶液至PH7.2～7.6，之后在37℃恒溫箱中放置0.8～1.2h，獲得可注射的ECM水凝膠；

E.制備Eze-ECM水凝膠，稱取一定量的Eze，將其放入至藥品磨粉機中磨粉，稱取一定量的Eze加入ECM水凝膠溶液中，低溫攪拌至溶解，最后置于4℃下靜置24h，獲得Eze-ECM水凝膠。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述步驟C中，放置于0.1％的過氧乙酸溶液中浸泡時間為2h，所述0.1％的過氧乙酸溶液液面沒出浸泡物5cm。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述步驟D中，在室溫狀態(tài)下攪拌消化時間為48h，所述氫氧化鈉滴定溶液的PH值為7.4，所述37℃恒溫箱中放置時間為1h。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述步驟E中，Eze-ECM水凝膠的配比調(diào)制結(jié)果為含10mg/mlEze的10％(w/v)ECM水凝膠。