[發明專利]一種Eze-ECM水凝膠的制備方法

在審

• 申請號: 202111507900.1
• 申請日: 2021-12-10
• 公開（公告）號: CN114159470A
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: 陳剛
• 申請（專利權）人: 陳剛
• 主分類號: A61K35/38
• 分類號: A61K35/38;A61K31/397;A61K9/00;A61P25/28;C12N5/071
• 代理公司: 武漢菲翔知識產權代理有限公司 42284
• 代理人: 劉谷紅

1.一種Eze-ECM水凝膠的制備方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

A.準備工作，將刮腸機和操作臺殺菌消毒，豬小腸放置于恒溫箱保存，將0.1％的過氧乙酸溶液，PBS緩沖液，0.1M鹽酸-胃蛋白酶液，0.1M氫氧化鈉均放置于陰涼處存放；

B.豬小腸預處理，以豬小腸為原料，通過刮腸機刮去豬小腸的漿膜層、肌層和粘膜層，留置小腸粘膜下層及粘膜固有層；

C.脫細胞處理，將步驟B中留置的小腸粘膜下層及粘膜固有層均放置于0.1％的過氧乙酸溶液中浸泡1.5～2.5h，并采用PBS緩沖液清洗瀝干水分，隨后放置于低溫箱中低溫冷凍干燥，初步獲得ECM粉末；

D.凝膠化處理，將步驟C中ECM粉末溶解于0.1M鹽酸-胃蛋白酶液中，在室溫狀態下攪拌消化46h～50h，采用0.1M氫氧化鈉滴定溶液至PH7.2～7.6，之后在37℃恒溫箱中放置0.8～1.2h，獲得可注射的ECM水凝膠；

E.制備Eze-ECM水凝膠，稱取一定量的Eze，將其放入至藥品磨粉機中磨粉，稱取一定量的Eze加入ECM水凝膠溶液中，低溫攪拌至溶解，最后置于4℃下靜置24h，獲得Eze-ECM水凝膠。

2.根據權利要求1所述的一種Eze-ECM水凝膠的制備方法，其特征在于，所述步驟C中，放置于0.1％的過氧乙酸溶液中浸泡時間為2h，所述0.1％的過氧乙酸溶液液面沒出浸泡物5cm。

3.根據權利要求1所述的一種Eze-ECM水凝膠的制備方法，其特征在于，所述步驟D中，在室溫狀態下攪拌消化時間為48h，所述氫氧化鈉滴定溶液的PH值為7.4，所述37℃恒溫箱中放置時間為1h。

4.根據權利要求1所述的一種Eze-ECM水凝膠的制備方法，其特征在于，所述步驟E中，Eze-ECM水凝膠的配比調制結果為含10mg/mlEze的10％(w/v)ECM水凝膠。

5.根據權利要求1所述的一種Eze-ECM水凝膠的制備方法，其特征在于，所述鹽酸-胃蛋白酶液和氫氧化鈉的單位均為1mg/ml，所述陰涼存放處的溫度不得低于20℃。