[發(fā)明專(zhuān)利]用于皮膚抗衰老間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體組合物的制備方法及產(chǎn)品和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111507419.2
• 申請(qǐng)日: 2021-12-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114159374A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔大祥;張文樺
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海納米技術(shù)及應(yīng)用國(guó)家工程研究中心有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K8/99
• 分類(lèi)號(hào): A61K8/99;A61K8/98;A61K8/67;A61K8/49;A61K8/34;A61Q19/08;C12N5/0775
• 代理公司: 上海東亞專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 31208
• 代理人: 董梅

本發(fā)明公開(kāi)了一種用于皮膚抗衰老的臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體組合物的制備方法及其產(chǎn)品和應(yīng)用，臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng):正常進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、消化、傳代；臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的獲取:收集臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液上清，進(jìn)行離心和超濾濃縮，得干細(xì)胞外泌體；抗氧化劑的混合：臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體與抗氧化劑物理混合。本發(fā)明所述臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體組合物中含有臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體和抗氧化劑，具有降低細(xì)胞內(nèi)活性氧含量，促進(jìn)細(xì)胞增殖及抗細(xì)胞衰老的作用，可在抗衰老方向的化妝品中應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體及其用途，具體涉及一種用于皮膚抗衰老的臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞干細(xì)胞外泌體組合物的制備方法及其產(chǎn)品和應(yīng)用。

背景技術(shù)

外泌體(Exosome)是由細(xì)胞內(nèi)囊泡結(jié)構(gòu)釋放到細(xì)胞外的一種膜性囊泡，直徑約40—160nm(平均直徑為100nm)。由于質(zhì)膜和多囊泡體之間融合的結(jié)果，外泌體樣囊泡通過(guò)胞吐作用被分泌到胞外空間。外泌體樣囊泡被脂質(zhì)雙層分為內(nèi)部和外部，可以包含細(xì)胞的許多成分，包括DNA、RNA、脂質(zhì)、代謝物、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞表面蛋白。外泌體的主要功能是進(jìn)行細(xì)胞間信息交流，一般是通過(guò)傳遞膜表面或腔內(nèi)的生物分子來(lái)進(jìn)行細(xì)胞間信號(hào)傳遞，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的正常生理功能。外泌體的組成成分均來(lái)源于細(xì)胞，避免了人工合成材料的使用帶來(lái)的細(xì)胞毒性、生物相容性等問(wèn)題。由于外泌體繼承了細(xì)胞的磷脂、表面蛋白等物質(zhì)，具有豐富的生理功能，可以提高有效成分如抗氧化劑的傳遞效率。

皮膚衰老是人體衰老固有的生理機(jī)制和外界風(fēng)吹日曬、環(huán)境污染等損害共同作用的結(jié)果。皮膚衰老通常體現(xiàn)在皮膚彈性降低和皮膚皺紋的產(chǎn)生。據(jù)報(bào)道，膠原蛋白和彈性蛋白的減少將導(dǎo)致皮膚彈性降低和皮膚皺紋產(chǎn)生，膠原蛋白和彈性蛋白受膠原蛋白酶和彈性蛋白酶調(diào)控，膠原蛋白酶和彈性蛋白酶能夠引起膠原蛋白和彈性蛋白降解，從而導(dǎo)致膠原蛋白和彈性蛋白減少，導(dǎo)致皺紋產(chǎn)生，皮膚彈性減低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種用于皮膚抗衰老的臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體組合物的制備方法。

本發(fā)明的再一目的在于：提供一種上述方法制備的用于皮膚抗衰老的臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體組合物產(chǎn)品。

本發(fā)明的又一目的在于：提供一種上述產(chǎn)品的應(yīng)用。

本發(fā)明目的通過(guò)以下方案實(shí)現(xiàn)：一種用于皮膚抗衰老的臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體組合物的制備方法，包括臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)、外泌體提取、與抗氧化劑混合，包括以下步驟:

(1)臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng):進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、消化、傳代；

(2)臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的獲取:收集臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液上清，進(jìn)行離心和超濾濃縮，得干細(xì)胞外泌體；

(3)抗氧化劑的混合：臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體與抗氧化劑按質(zhì)量比為1:3～5:1物理混合，所述抗氧化劑包括花青素、白藜蘆醇、維生素A、維生素C、維生素E、類(lèi)胡蘿卜素成分中的一種或幾種。

在上述方案基礎(chǔ)上，優(yōu)選的，收集傳代次數(shù)為10代以內(nèi)的細(xì)胞。

優(yōu)選的，選擇2～10代細(xì)胞是由于低代數(shù)的原代細(xì)胞具有更好的細(xì)胞因子分泌功能。

將代次在2～10代內(nèi)的臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞按照1×10⁵個(gè)/ml的密度進(jìn)行正常培養(yǎng)，細(xì)胞融合度達(dá)到80％以上時(shí)，更換新鮮的不含抗生素的無(wú)血清培養(yǎng)基，培養(yǎng)3～5d后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，即條件培養(yǎng)基。所述條件培養(yǎng)基在4℃，100～300g條件下離心5～10min，棄去沉淀雜質(zhì)，收集上層液體，用2000g離心20min，收集上層液體，再通過(guò)超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，去除小分子，最后將所得液體用0 .22μm無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾除菌，獲得外泌體。

優(yōu)選的，所述的超濾膜為100000NW CO超濾膜。

培養(yǎng)基不含動(dòng)物源血清。