[發明專利]用于皮膚抗衰老間充質干細胞外泌體組合物的制備方法及產品和應用

在審

• 申請號: 202111507419.2
• 申請日: 2021-12-10
• 公開（公告）號: CN114159374A
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: 崔大祥;張文樺
• 申請（專利權）人: 上海納米技術及應用國家工程研究中心有限公司
• 主分類號: A61K8/99
• 分類號: A61K8/99;A61K8/98;A61K8/67;A61K8/49;A61K8/34;A61Q19/08;C12N5/0775
• 代理公司: 上海東亞專利商標代理有限公司 31208
• 代理人: 董梅

1.一種用于皮膚抗衰老的臍帶來源的間充質干細胞外泌體組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:

(1)臍帶來源的間充質干細胞的培養:進行細胞培養、消化、傳代；

(2)臍帶來源的間充質干細胞外泌體的獲取:收集臍帶來源的間充質干細胞培養液上清，進行離心和超濾濃縮，得干細胞外泌體；

(3)抗氧化劑的混合：臍帶來源的間充質干細胞外泌體與抗氧化劑按質量比為1:3～5:1物理混合，所述抗氧化劑包括花青素、白藜蘆醇、維生素A、維生素C、維生素E、類胡蘿卜素成分中的一種或幾種。

2.根據權利要求1所述的用于皮膚抗衰老的臍帶來源的間充質干細胞外泌體組合物的制備方法，其特征在于，收集傳代次數為10代以內的細胞。

3.根據權利要求1或2所述的用于皮膚抗衰老的臍帶來源的間充質干細胞外泌體組合物的制備方法，其特征在于，將代次在2～10代內的臍帶來源的間充質干細胞按照1×10⁵個/ml的密度進行正常培養，細胞融合度達到80％以上時，更換新鮮的不含抗生素的無血清培養基，培養3～5d后收集細胞培養上清，即條件培養基；所述條件培養基在4℃，100～300g條件下離心5～10min，棄去沉淀雜質，收集上層液體，用2000g離心20min，收集上層液體，再通過超濾膜進行超濾濃縮，去除小分子，最后將所得液體用0 .22μm無菌過濾器過濾除菌，獲得外泌體。

4.根據權利要求3所述的用于皮膚抗衰老的臍帶來源的間充質干細胞外泌體組合物的制備方法，其特征在于，培養基不含動物源血清。

5.根據權利要求3所述的用于皮膚抗衰老的臍帶來源的間充質干細胞外泌體組合物的制備方法，其特征在于，超濾膜為100000NW CO超濾膜。

6.根據權利要求3或4或5任一項所述的用于皮膚抗衰老的臍帶來源的間充質干細胞外泌體組合物的制備方法，其特征在于，

(1)細胞培養：將購自市場的P2臍帶來源的間充質干細胞，按照1×10⁵個/ml的接種密度進行正常培養，傳代次數控制在P10以內，直至收集到足夠的細胞，收集培養液上清，所用培養基不含抗生素和動物源血清；

(2)外泌體獲得：將收集獲得的培養液上清在4℃，100g條件下離心5min，棄去沉淀雜質，收集上層液體，用2000g離心20min，收集上層液體，再通過100000NWCO超濾膜進行超濾濃縮，去除小分子，最后將所得液體用0 .22μm無菌過濾器過濾除菌，獲得外泌體；

(3) 外泌體與抗氧化劑混合：

步驟（2）所得外泌體溶液，與花青素、白藜蘆醇、維生素C抗氧化劑按質量比為1:1進行物理混合，所述的抗氧化劑為花青素、白藜蘆醇、維生素C的質量比為4：1：1的混合物。

7.一種用于皮膚抗衰老的臍帶來源的間充質干細胞外泌體組合物，其特征在于根據權利要求1-6任一所述的方法制備得到，包含了臍帶來源的間充質干細胞外泌體和抗氧化劑。

8.一種根據權利要求7所述臍帶來源的間充質干細胞外泌體組合物的應用，用于制備包括水劑、乳劑、膏霜、凝膠或粉劑的皮膚抗衰老化妝品。

9.根據權利要求8所述臍帶來源的間充質干細胞外泌體組合物的應用，其特征在于，所述臍帶來源的間充質干細胞外泌體組合物在化妝品中的含量為1～20％。

10.根據權利要求8或9所述臍帶來源的間充質干細胞外泌體組合物的應用，其特征在于，使用方法為涂敷。