[發(fā)明專利]一種尿液中外泌體的富集方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111505906.5
• 申請(qǐng)日: 2021-12-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114199665A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李嘉欣;宋雷;任麗;馬聰聰;原續(xù)波;趙瑾;陳亮宇;李捷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 譜天（天津）生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N1/40
• 分類號(hào): G01N1/40;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/72;G01N15/02
• 代理公司: 南京中律知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32341
• 代理人: 祝坤

1.一種尿液中外泌體的富集方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、將尿液進(jìn)行低速離心，保留上清液為待測(cè)尿液樣本；

S2、向待測(cè)尿液樣本中加入結(jié)合緩沖液及硅鋁酸鹽材料，得到混懸液；

S3、將所述混懸液孵育后，進(jìn)行高速離心，去除上清液，保留沉淀Ⅰ；

S4、采用清洗緩沖液重懸所述沉淀Ⅰ得到重懸液，將所述重懸液高速離心后去除上清，保留沉淀Ⅱ，重復(fù)該步驟數(shù)次，最后得到包含外泌體的沉淀。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中外泌體的富集方法，其特征在于，步驟S1中，所述低速離心的條件如下：離心力為200～10,000g，溫度為2～26℃，時(shí)間為1～60分鐘。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中外泌體的富集方法，其特征在于，步驟S2中，所述結(jié)合緩沖液成分包括Tris、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸鉀、磷酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉、氯化鉀、氯化鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、巴比妥酸、巴比妥鈉、氫氧化鈉、鹽酸、EDTA、SDS、NP-40、CHAPS、吐溫、Triton、PEG、乙腈、甲醇中的一種或任意組合。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中外泌體的富集方法，其特征在于，步驟S2中，所述硅鋁酸鹽材料選自3A型、4A型、5A型、10Z型、13Z型、Y型或絲光沸石型中的一種或幾種的混合物，或者某一類型中幾種的混合物。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中外泌體的富集方法，其特征在于，步驟S2中，所述硅鋁酸鹽材料選自NaY、USY和絲光沸石的混合物，優(yōu)選三者的質(zhì)量比為NaY：USY：絲光沸石＝1：1：1。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中外泌體的富集方法，其特征在于，步驟S3中，所述孵育的條件為：18～37℃下孵育1～120分鐘；所述高速離心的條件如下：離心力為2,000～22,000g，溫度為2～26℃，時(shí)間為1～120分鐘。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中外泌體的富集方法，其特征在于，步驟S4中，所述清洗緩沖液選自步驟S1所使用的結(jié)合緩沖液或相應(yīng)稀釋液；所述高速離心的條件如下：離心力為2,000～22,000g，溫度為2～26℃，時(shí)間為1～120分鐘；該步驟可重復(fù)3次。