[發明專利]基于多重熒光定量ARMS-PCR技術的新冠病毒奧密克戎突變序列檢測技術及其應用

在審

• 申請號: 202111497771.2
• 申請日: 2021-12-09
• 公開（公告）號: CN113943838A
• 公開（公告）日: 2022-01-18
• 發明（設計）人: 孔祥賓;李萬帥;湯麗麗
• 申請（專利權）人: 常州國藥醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 常州市權航專利代理有限公司 32280
• 代理人: 黃晶晶

1.一種用于檢測新冠病毒核酸S基因突變類型的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括以下任一種或幾種引物和探針，其中每組中的引物都包含正向引物和反向引物，每個所述探針的兩端分別標記有熒光報告基團/熒光淬滅基團：

a.用于檢測S基因突變類型：序列位置23599，序列變化TG的引物和探針；其中正向引物的核苷酸序列如：SEQ ID No.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，其中探針的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

b.用于檢測S基因突變類型：序列位置23048，序列變化GA的引物和探針；其中正向引物的核苷酸序列如：SEQ ID No.4所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，其中探針的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

c.用于檢測S基因突變類型：序列位置23202，序列變化CA的引物和探針；其中正向引物的核苷酸序列如：SEQ ID No.7所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示，其中探針的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；

d.用于檢測S基因突變類型：序列位置22898，序列變化GA的引物和探針；其中正向引物的核苷酸序列如：SEQ ID No.10所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，其中探針的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光報告基團/熒光淬滅基團選自選自FAM、VIC或HEX、ROX、NED、CY3或CY5熒光報告基團/MGB或非MGB的BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1、Tamra和Quencher熒光淬滅基團且試劑盒中各個所述探針上熒光報告基團互不相同。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括以下組分中的任一種或幾種：PCR反應液、酶混合液、陽性對照、陰性對照。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應液包括緩沖液、MgCl₂、dUTP和dNTPs；所述酶混合液包括Taq酶、反轉錄酶和UNG酶。

5.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照為含有新冠病毒突變序列的假病毒。

6.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述陰性對照為含有部分新冠病毒的基因序列的假病毒。

7.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括用于檢測內標的探針。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述探針包括核苷酸序列如SEQ IDNo.13、SEQ ID No.14、SEQ ID No.15所示的多核苷酸中的任一種或幾種。

9.如權利要求1-8任一項所述試劑盒用于檢測以下任一種或幾種新冠病毒核酸S基因突變類型中的用途：a,S基因突變類型：序列位置23599，序列變化TG；b.S基因突變類型：序列位置23048，序列變化GA；c.S基因突變類型：列位置23202，序列變化CA；d.S基因突變類型：序列位置22898，序列變化GA。

10.如權利要求1-8任一項所述試劑盒在制備檢測以下任一種或幾種新冠病毒核酸S基因突變類型的產品中的用途：a.S基因突變類型：序列位置23599，序列變化TG；b.S基因突變類型：序列位置23048，序列變化GA；c.S基因突變類型：序列位置23202，序列變化CA；d.S基因突變類型：序列位置22898，序列變化GA。