[發(fā)明專利]檢測魚肉新鮮度的膠體金免疫層析試紙條及其制備和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111488784.3
• 申請日: 2021-12-07
• 公開（公告）號: CN114217072A
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊方;陳紅;吳儀;王淑芬;姜啟興;許艷順;于沛沛;夏文水;余達威;高沛
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/52
• 代理公司: 蘇州市中南偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32257
• 代理人: 夏蘇娟

本發(fā)明屬于食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測魚肉新鮮度的膠體金免疫層析試紙條及其制備方法和應(yīng)用。該膠體金免疫層析試紙條，包括底板、檢測墊、金標墊、樣品墊和吸水墊；所述檢測墊上設(shè)有T線和C線，所述T線噴涂小清蛋白，所述C線噴涂羊抗鼠多克隆抗體；所述金標墊上噴涂有膠體金標記的小清蛋白單克隆抗體。本發(fā)明使用小清蛋白反映魚肉新鮮度客觀、準確；膠體金免疫層析試紙檢測取樣量少，對檢測樣品破壞小；靈敏度高，操作簡便；檢測時間短、檢測結(jié)果直觀；目標分析物明確，蛋白可與抗體特異性結(jié)合，可實現(xiàn)特異性檢測；試紙條穩(wěn)定性好，實驗結(jié)果可長期保存；檢測過程無有害物質(zhì)參與，是一種綠色環(huán)保的檢測手段。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測魚肉新鮮度的膠體金免疫層析試紙條及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

魚類營養(yǎng)豐富、含水量高、肌肉組織中蛋白酶活性較高，容易腐敗變質(zhì)，因此對于魚肉的新鮮度評價和分級非常必要。

目前評價魚肉新鮮度的方法有很多，主要有感官評價、微生物、理化變化。例如專利CN112285237A一種基于生物胺含量的魷魚新鮮度評價方法采用生物胺判定魷魚的新鮮度；CN111523542A采用菌落總數(shù)作為判定魚肉新鮮度的依據(jù)；CN103424374A使用帶魚體內(nèi)TVB-N(揮發(fā)性鹽基氮)含量建立檢測模型，根據(jù)TVB-N含量來評價帶魚的新鮮度等級。然而魚肉的劣變是一個綜合變化的過程，以單一指標作為鮮度等級的劃分依據(jù)具有片面性，因此用不同指標從多方面反映魚肉新鮮度會帶來更加客觀和全面的結(jié)果。

蛋白質(zhì)是魚肉的基本組成部分之一，也是品質(zhì)變化的主要因素，其降解或變性程度與魚肉品質(zhì)具有密切聯(lián)系。隨著蛋白組學(xué)技術(shù)的發(fā)展，篩選水產(chǎn)品貯藏過程中的新鮮度指示蛋白的研究已有頗多研究，然而直接應(yīng)用蛋白組學(xué)技術(shù)評價新鮮度技術(shù)專業(yè)性強、儀器依賴度高、費時且成本高，難以將新鮮度指示蛋白的研究成果普及應(yīng)用。膠體金免疫層析技術(shù)是將抗原抗體特異性反應(yīng)與膠體金這一可見標記物相結(jié)合，通過層析作用，以膜為媒介實現(xiàn)檢測。制作針對新鮮度指示蛋白的膠體金免疫層析試紙，可檢測不同貯藏時間該蛋白的變化。該檢測方法取樣量少，操作簡便，無需專業(yè)人員操作和復(fù)雜精密設(shè)備，可適用于現(xiàn)場檢測和大樣本量檢測，將新鮮度指示蛋白與膠體金免疫層析技術(shù)結(jié)合檢測水產(chǎn)品新鮮度具有重要的現(xiàn)實意義和實用價值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種檢測魚肉新鮮度的膠體金免疫層析試紙條及其制備方法，該免疫層析試紙條用于魚肉新鮮度的快速檢測，具有取樣量少、操作簡單的特點。

按照本發(fā)明的技術(shù)方案，所述檢測魚肉新鮮度的膠體金免疫層析試紙條，包括底板、檢測墊、金標墊、樣品墊和吸水墊；所述檢測墊設(shè)置于所述底板的中部，檢測墊上設(shè)有T線和C線，所述T線噴涂小清蛋白，所述C線噴涂羊抗鼠多克隆抗體；所述樣品墊設(shè)置于底板上靠近所述檢測墊T線的一側(cè)，所述金標墊交疊設(shè)置于樣品墊與檢測墊之間，金標墊上噴涂有膠體金標記的小清蛋白單克隆抗體；所述吸水墊設(shè)置于底板上靠近所述檢測墊C線的一側(cè)并部分交疊于檢測墊上。

本發(fā)明的第二方面提供了一種檢測魚肉新鮮度的膠體金免疫層析試紙條的制備方法，包括以下步驟，

S1：提取純化魚肉小清蛋白；

S2：將所述小清蛋白和羊抗鼠多克隆抗體噴涂在檢測墊基材上分別形成T線和C線，烘干得到檢測墊；

S3：將樣品墊、吸水墊和所述檢測墊組裝到底板上，切割，得到寬度為3-4mm的試紙條；

S4：膠體金標記小清蛋白單克隆抗體(一抗)，得到金標抗體，將所述金標抗體噴涂在活化金標墊上，得到金標墊；

將所述金標墊組裝到所述試紙條中，得到所述膠體金免疫層析試紙條。

具體的，所述檢測墊基材的材質(zhì)為NC膜(硝酸纖維素膜)、聚偏二氟乙烯膜、聚酯膜或醋酸纖維素膜，優(yōu)選為NC膜；底板為PVC(聚氟乙烯)襯板。

進一步的，所述步驟S1的具體步驟如下，