[發明專利]一種低鹽濃度肝素鈉與活性腸蛋白肽分離聯產工藝

有效

• 申請號: 202111488692.5
• 申請日: 2021-12-07
• 公開（公告）號: CN113999330B
• 公開（公告）日: 2022-08-19
• 發明（設計）人: 陳佳彤;陳講一;余璞斐;黃帥;徐袁
• 申請（專利權）人: 潢川縣鵬升畜產品有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/22
• 代理公司: 鄭州大豫知識產權代理事務所(普通合伙) 41214
• 代理人: 靳鵬超

本發明涉及生物制藥領域，特別涉及一種低鹽濃度肝素鈉與活性腸蛋白肽分離聯產工藝。以新鮮豬小腸粘膜為起始原料，經刮腸機將腸衣剝離得腸粘膜，加入一種抗氧化保護劑將粘膜蛋白保護以提高腸粘膜蛋白肽附加值。在低鹽濃度條件下，聯合中性復合型蛋白水解酶水解與高溫堿性水解高效地將蛋白與糖胺聚糖解離，然后采用樹脂吸附、梯度鹽度洗脫、醇沉、干燥、粉碎等物理操作，最終實現粗品肝素鈉與活性腸蛋白聯產。該聯產工藝有利于較少含鹽等廢水排放、提高產品附加值，具有重要的經濟價值。

技術領域

本發明涉及生物制藥領域，具體涉及一種低鹽濃度肝素鈉與活性腸蛋白肽分離聯產工藝。

背景技術

肝素鈉屬于結構復雜的糖胺聚糖分子，是臨床上最有效的抗凝血、抗血栓藥物。中國藥典2020年版規定肝素鈉生產用原料應來源于健康的豬小腸粘膜。中國是生豬屠宰大國，約控制全球70％的肝素原料上游產業鏈。豬小腸粘膜中主要含蛋白、糖胺聚糖、核酸、脂類物質等，其中糖胺聚糖與蛋白以共價鍵結合，也稱蛋白聚糖。粗品肝素鈉生產過程需要首先將蛋白與糖胺聚糖解離，然后經樹脂吸附洗脫、醇沉、干燥等步驟制得粗品肝素鈉。常用的粗品肝素鈉提取解離方法有兩種：酶解法與鹽析法。

酶解法技術路線：(1)刮腸提取腸粘膜(2)酶解：向腸粘膜混合液中加入2度鹽水，再用氫氧化鈉溶液調節pH值至8.0-9.0，將混合液溫度控制在35-40℃，然后添加胰蛋白酶，保溫4-6h，加熱滅活。(3)分離：將變性的蛋白和油脂等從酶解液中分離。(4)降溫至50℃上下。(5)吸附：將酶解液pH值調至＞8.0，鹽度低于2.7％。于50℃條件下進行樹脂攪拌吸附。(6)樹脂收集：用樹脂收集管收集吸附后的樹脂，并用純化水進行洗滌，去除蛋白、油脂等雜質。(7)洗脫：用15％的鹽水洗滌，收集洗脫液。(8)醇沉。(9)烘干粉碎。

鹽解法技術路線：(1)刮腸提取腸粘膜(2)鹽解：向腸粘膜混合液中加入4度鹽水，再用氫氧化鈉溶液調節pH值至8.0-9.0，將混合液溫度控制在58℃，保溫4-6h。(3)吸附：將酶解液pH值調至＞8.0，鹽度低于2.7％。于50℃條件下進行樹脂攪拌吸附。(4)樹脂收集：用樹脂收集管收集吸附后的樹脂，并用純化水進行洗滌，去除蛋白、油脂等雜質。(5)洗脫：用15％的鹽水洗滌，收集洗脫液。(6)醇沉。(7)烘干粉碎。

上述酶解法與鹽解法生產工藝是目前工業上常用的兩條生產工藝，由于工藝過程采用較高的鹽度和溫度，對腸粘膜蛋白造成變性破壞，變性的腸蛋白主要被用作畜牧業飼料。鹽解法生產的粗品肝素鈉分子量偏高，部分批次容易對后續的肝素鈉原料藥和低分子肝素原料藥生產造成影響。酶解法生產的肝素鈉收率偏低，導致生產成本較高。鹽解法與酶解法產生的生產廢水鹽度都偏高(高于10000ppm)，可達生活污水的5倍以上，造成比較大的環保壓力。

CN103724456公開了有關肝素鈉常溫無鹽提取工藝，然而該工藝存在如下缺點：復合酶中的核酸酶、脂肪酶等組分成本過高、常溫條件下蛋白聚糖解離較慢且反應不徹底。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供一種低鹽濃度肝素鈉與活性腸蛋白肽分離聯產工藝，以新鮮豬小腸粘膜為起始原料，經刮腸機將腸衣剝離得腸粘膜，加入一種抗氧化保護劑將粘膜蛋白保護以提高腸粘膜蛋白肽附加值。在低鹽濃度條件下，聯合中性復合型蛋白水解酶水解與高溫堿性水解高效地將蛋白與糖胺聚糖解離，然后采用樹脂吸附、梯度鹽度洗脫、醇沉、干燥、粉碎等物理操作，最終實現粗品肝素鈉與活性腸蛋白聯產。

本發明解決上述問題的技術方案如下：

一種低鹽濃度肝素鈉與活性腸蛋白肽分離聯產工藝，包括以下工藝步驟：以新鮮豬小腸為原料，經刮腸機將腸衣剝離得腸粘膜，加入抗氧化劑對粘膜蛋白進行保護，經低鹽度酶解、樹脂吸附、梯度鹽度洗脫、醇沉、干燥、粉碎等操作，實現粗品肝素鈉與活性腸蛋白聯產。

本發明具有如下有益效果：