[發明專利]一種神經元特異性烯醇化酶校準品及凍干方法

在審

• 申請號: 202111486963.3
• 申請日: 2021-12-07
• 公開（公告）號: CN116240203A
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 王秀東;杜曄;張亞楠
• 申請（專利權）人: 上海思路迪生物醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N9/96
• 分類號: C12N9/96;C12N9/88;C12Q1/527
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所(普通合伙) 31251
• 代理人: 王法男

本發明公開了一種神經元特異性烯醇化酶校準品及凍干方法。所述神經元特異性烯醇化酶校準品由緩沖液、保護劑、NSE抗原組成，所述緩沖液為PBS和/或Tris緩沖液，所述保護劑由糖類、蛋白類、氨基酸、抗氧化劑、離子組成；所述氨基酸的濃度為2～20g/L。本發明提供的神經元特異性烯醇化酶校準品組分簡單，NSE凍干回收率、瓶間和瓶內均一性明顯高于現有技術中的其他發明方案，在37℃條件下保存14天后仍滿足性能要求。本發明的NSE凍干方法能夠提高NSE的凍干回收率，減少抗原用量，降低生產成本，并提高凍干的均一性，保證了NSE校準品凍干制劑的品質。

技術領域

本發明體外診斷技術領域，具體涉及一種神經元特異性烯醇化酶校準品及凍干方法。

背景技術

神經元特異性烯醇化酶(NSE)是一種烯醇化酶，通過ENO2基因編碼得到，是一種包含γ亞基的同工酶。NSE有γγ和αγ兩種二聚同工酶構型。γγ同型二聚體同工酶一般由神經細胞或神經內分泌細胞產生，而αγ異質二聚體同工酶一般由神經元細胞支持系統的星形膠質細胞，小神經膠質細胞，寡樹突膠質細胞和腦膜的纖維母細胞產生。另外紅細胞和血小板也含有少量的αγ異質二聚體同工酶。和其它烯醇化酶一樣，NSE不但具有重要的細胞內酶促作用，其對細胞的生長、分化、修復和死亡也有很重要的作用。

一般的NSE不會出現在細胞外基質中，但通過大量的神經元損傷和死亡研究發現，當腦組織缺氧、缺血時，細胞膜完整性受到破壞，由于NSE不與細胞內肌動蛋白結合，故γγ同型二聚體同工酶會進入細胞外基質的間隙，釋放入腦脊液或通過血腦屏障進入外周循環，因此可以在腦脊液或者血清中檢測到。因此NSE被用作評估腦損傷和小細胞肺癌的一個標志物。

健康人血清的NSE濃度很低(10ng/mL)，并且在24小時左右會降低一半。校準品作為檢測系統的重要部分，如果穩定性不能滿足相應的要求，則會影響試劑盒的生產、運輸與保存。目前為了提高NSE的穩定性，一般均是通過凍干的方法制備NSE凍干制劑，但是凍干過程中NSE不穩定，導致NSE回收率較低。例如國內專利：CN109991053A、CN112595848A、CN113088508A等，這些專利均是利用特定的凍干緩沖液，通過特定的凍干參數凍干后得到NSE凍干制劑，與凍干前NSE濃度比較，NSE濃度的降幅達到12％～18％。因此尋找一種高效穩定的NSE校準品制備方法對促進NSE的檢測應用具有重大的意義。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種神經元特異性烯醇化酶校準品及凍干方法。主要解決現有技術中NSE凍干制劑不穩定、回收率低的技術問題。

本發明為實現上述目的所采用的技術方案如下：

一種神經元特異性烯醇化酶校準品，其由緩沖液、保護劑、NSE抗原組成，所述緩沖液為PBS和/或Tris緩沖液，所述保護劑由糖類、蛋白類、氨基酸、抗氧化劑、離子組成；所述氨基酸的濃度為0.2～2g/L。

作為優選實施方案，所述氨基酸選自甘氨酸、賴氨酸、色氨酸中的一種或多種。

作為優選實施方案，所述緩沖液的濃度為20mM～80mM，pH值為7.0～7.8。

作為優選實施方案，所述緩沖液的濃度為30mM～50mM，pH值為7.3～7.5。

作為優選實施方案，所述糖類選自海藻糖、蔗糖中的一種或多種；所述蛋白類選自人血清白蛋白、牛血清白蛋白中的一種或多種。

作為優選實施方案，所述抗氧化劑選自3wt％的Proclin300溶液、20wt％的NaN₃溶液中的一種或多種；所述離子選自NaCl、MgSO₄、MgCl₂中的一種或多種。

作為優選實施方案，所述糖類在校準品中的濃度為3-4g/L；所述蛋白類在校準品中的濃度為5-6g/L。