[發(fā)明專利]一種通用型土壤基因組DNA提取試劑盒及其使用方法

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• 申請日: 2021-12-06
• 公開（公告）號: CN114107286A
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉充;劉嘉
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱市青蛙生物科技有限責(zé)任公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 李紅媛

一種通用型土壤基因組DNA提取試劑盒及其使用方法，它涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，本發(fā)明要解決國內(nèi)現(xiàn)有土壤基因組DNA提取試劑盒操作步驟繁冗、總DNA提取量低、提取質(zhì)量差的問題；克服國外土壤基因組DNA提取試劑盒成本高、提取的DNA片段碎片化，不完整，適用土壤類型較少的問題。試劑盒分兩種，一種包含溶液Q0、溶液Q1、溶液Q2、溶液Q3、溶液Q4、溶液Q5和溶液Q6；另一種包含溶液W1、溶液W2、溶液W3、溶液W4和溶液W5；本發(fā)明的試劑盒克服現(xiàn)有試劑盒操作步驟繁冗、總DNA提取量低、提取質(zhì)量差、過度依賴酚氯仿此類有毒有害物質(zhì)問題，操作過程簡單快速，成分規(guī)避了有毒有害物質(zhì)，獲取的DNA純度高，完整性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種通用型土壤基因組DNA提取試劑盒及其使用方法。

背景技術(shù)

利用分子生物學(xué)手段闡釋土壤、淤泥、自然水體等復(fù)雜環(huán)境的菌群結(jié)構(gòu)及其演替過程，已經(jīng)成為促進當(dāng)今環(huán)境科學(xué)與工程深度研究和發(fā)展的新領(lǐng)域。分子生物學(xué)技術(shù)操作離不開基因組DNA的提取和制備，傳統(tǒng)的人工DNA提取技術(shù)耗時長、操作繁瑣、成本高且DNA總產(chǎn)率低，降低了環(huán)境樣本的實際生物量，限制了后續(xù)的生物相分析結(jié)果。基于傳統(tǒng)的人工DNA提取技術(shù)的缺點，德國、美國等歐美國家設(shè)計研發(fā)了通用型土壤基因組DNA提取試劑盒。目前市面上流通的通用型土壤基因組DNA提取試劑盒均為進口，具有廣譜性強，可針對土壤、活性污泥、流域等環(huán)境樣本的DNA提取，耗時短、操作簡便且DNA總產(chǎn)率高的優(yōu)點，然而仍存在(1)價格高昂，極大地增加了實驗分析成本，(2)進口周期長，影響環(huán)境樣本的時效性，極大地限制了實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性、便捷性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是解決國內(nèi)現(xiàn)有土壤基因組DNA提取試劑盒操作步驟繁冗、總DNA提取量低、提取質(zhì)量差的問題；克服國外土壤基因組DNA提取試劑盒成本高、提取的DNA片段碎片化，不完整，適用土壤類型較少的問題，而提供一種通用型土壤基因組DNA提取試劑盒及其使用方法。

本發(fā)明的一種通用型土壤基因組DNA提取試劑盒，它包括研磨管、吸附柱、溶液Q0、溶液Q1、溶液Q2、溶液Q3、溶液Q4、溶液Q5和溶液Q6；

所述的吸附柱規(guī)格為2mL；

所述的研磨管內(nèi)裝1g石榴砂，直徑為1-1.5mm；

所述的溶液Q0包括1.5-2.5M Tris-HCl、3-6M NaCl、10-20mM EDTA、20-50mM鹽酸胍、250-300mM蛋白酶K和0.5-1M乙酸鉀，pH＝7.5；

所述的溶液Q1包括1M Tris-NaOH和質(zhì)量百分含量為2-5％十六烷基磺酸鈉，pH＝8.0；

所述的溶液Q2包括100-200mM乙酸鉀緩沖液和質(zhì)量百分含量為1-3％聚乙烯吡咯烷酮水溶液，pH＝4.0；

所述的溶液Q3包括100-200mM乙酸鉀緩沖液和質(zhì)量百分含量為15-30％的硫酸鎂溶液，pH＝3.0；

所述的溶液Q4包括0.5-1M異硫氰酸胍、5-7M乙酸鉀和體積百分含量為30-50％異丙醇，pH＝5.0；

所述的溶液Q5包括50-100mM Tris-HCl、0.1-0.5mM EDTA和體積百分含量為60-75％乙醇，pH＝5.0；

所述的溶液Q6包括10-50mM Tris-HCl，pH＝5.0。

進一步地，所述的溶液Q0、Q1、Q2、Q3、Q4、Q5和Q6均用乙酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH。

使用一種通用型土壤基因組DNA提取試劑盒的方法。

進一步地，所述的使用方法包括以下步驟：

(1)將土壤樣品加入到研磨管中，混勻；

(2)加入試劑盒中的Q1溶液50-100μL，顛倒混勻；