[發明專利]一種通用型土壤基因組DNA提取試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 202111482405.X
• 申請日: 2021-12-06
• 公開（公告）號: CN114107286A
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 劉充;劉嘉
• 申請（專利權）人: 哈爾濱市青蛙生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 李紅媛

1.一種通用型土壤基因組DNA提取試劑盒，其特征在于它包括研磨管、吸附柱、溶液Q0、溶液Q1、溶液Q2、溶液Q3、溶液Q4、溶液Q5和溶液Q6；

所述的吸附柱規格為2mL；

所述的研磨管內裝1g石榴砂，直徑為1-1.5mm；

所述的溶液Q0包括1.5-2.5M Tris-HCl、3-6M NaCl、10-20mM EDTA、20-50mM鹽酸胍、250-300mM蛋白酶K和0.5-1M乙酸鉀，pH＝7.5；

所述的溶液Q1包括1M Tris-NaOH和質量百分含量為2-5％十六烷基磺酸鈉，pH＝8.0；

所述的溶液Q2包括100-200mM乙酸鉀緩沖液和質量百分含量為1-3％聚乙烯吡咯烷酮水溶液，pH＝4.0；

所述的溶液Q3包括100-200mM乙酸鉀緩沖液和質量百分含量為15-30％的硫酸鎂溶液，pH＝3.0；

所述的溶液Q4包括0.5-1M異硫氰酸胍、5-7M乙酸鉀和體積百分含量為30-50％異丙醇，pH＝5.0；

所述的溶液Q5包括50-100mM Tris-HCl、0.1-0.5mM EDTA和體積百分含量為60-75％乙醇，pH＝5.0；

所述的溶液Q6包括10-50mM Tris-HCl，pH＝5.0。

2.根據權利要求1所述的一種通用型土壤基因組DNA提取試劑盒，其特征在于所述的溶液Q0、Q1、Q2、Q3、Q4、Q5和Q6均用乙酸或氫氧化鈉調節pH。

3.使用權利要求1所述的一種通用型土壤基因組DNA提取試劑盒的方法。

4.根據權利要求3所述的一種通用型土壤基因組DNA提取試劑盒的使用方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)將土壤樣品加入到研磨管中，混勻；

(2)加入試劑盒中的Q1溶液50-100μL，顛倒混勻；

(3)渦旋連續振蕩5-15min；

(4)室溫下，在12 000r/min-15000r/min轉速下振蕩后的樣品離心1-5min；

(5)轉移上清液至一個干凈的收集管中；

(6)加入100-500μL溶液Q2到上清液中，顛倒混勻，4℃孵育5-10min；其中，溶液Q2與上清液體積比為1：5；

(7)室溫下，在12 000r/min-15000r/min轉速下離心1-5min，轉移上清到新的收集管中；

(8)加入100-500μL溶液Q3到上清中，上下顛倒混勻，4℃孵育5-10min，室溫下，在12000r/min-15000r/min轉速下離心1-5min，轉移上清到新的收集管中，加入Q4溶液1000-2000μL到上清中，上下顛倒混勻，加載500-1000μL上清到吸附柱中，室溫下，在12 000r/min-15000r/min轉速下離心1-5min，棄去濾液，繼續加載上清到吸附柱中，重復至過濾完所有上清；

(9)加500-1000μL溶液Q5到離心柱中，在12 000r/min-15000r/min轉速下離心1-5min，棄去濾液；重復操作一次，吸附柱放回到收集管中，在12 000r/min-15000r/min轉速下離心3-5min，轉移離心柱到超凈臺上，晾干；

(10)離心柱轉入到新的收集管中，加入50-200μL溶液Q6，在12 000r/min-15000r/min轉速下離心1-5min，棄去離心柱，收集管中的總DNA。

5.根據權利要求3所述的一種通用型土壤基因組DNA提取試劑盒的使用方法，其特征在于所述的樣品為花壇土、花盆土、農田土、山林土、河道淤泥或厭氧污泥。