[發明專利]一種用于檢測魚肉制品中巴丁魚成分的引物組合、方法及其應用

在審

• 申請號: 202111482222.8
• 申請日: 2021-12-06
• 公開（公告）號: CN114480664A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 李家僑;張娜;謝艷輝;唐媛媛;斯澤恩;鄭舒尹
• 申請（專利權）人: 湛江海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京市廣友專利事務所有限責任公司 11237
• 代理人: 張仲波

本發明提供一種用于檢測魚肉制品中巴丁魚成分的引物組合，包含用于擴增包含巴丁魚COI基因中第一特異區段的核苷酸片段的第一引物對和用于擴增包含巴丁魚COI基因中第二特征區段的核苷酸片段的第二引物對；其中，所述第一特征區段的核苷酸序列為SEQ ID NO:2；第二特征區段的核苷酸序列為SEQ ID NO:3。本發明還提供了檢測魚肉制品中巴丁魚成分的方法、試劑盒及應用。本發明提供的方法簡單、快捷、準確。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及用于鑒定巴丁魚成分的特征序列、引 物及方法。

背景技術

巴丁魚(Pangasianodon hypophthalmus)，又名蘇氏圓腹 俗稱淡水鯊魚， 屬鯰形目、屬科、屬，產于馬來西亞、泰國等地的江河湖泊中，是東南亞 國家重要的養殖優良品種，該魚與羅非魚生長條件及飼養要求差不多，為我國 2000年引進的淡水優良品種。該魚肉質鮮美，無小刺，深受歡迎。

為了保護消費者權益，避免不公平的市場競爭，有必要對巴丁魚及其制品 進行快速鑒定，在申請號為202110917918.2的中國專利申請中公開了一種使 用實時熒光PCR手段快速檢測13種龍利魚源性成分的方法，提供了特異性引 物，能夠在55分鐘反應后鑒定魚肉制品中是否含有龍利魚成分，且進一步公 開了龍利魚基因組DNA靈敏度可達到10-3ng，在與巴沙魚粉混合的魚肉制品 中可檢測，質量分數靈敏度達到1％。雖然，該方法能夠確定魚肉制品中是否 含有龍利魚成分，但卻無法用于鑒定其中的巴丁魚成分。

針對上述問題，目前亟需提供一種方法對魚肉制品中的巴丁魚成分進行可 靠、高效、快速、準確的檢測。

發明內容

本發明目的提供可鑒別巴丁魚成分檢測的特征序列及引物，并提供巴丁魚 成分檢測的PCR快速檢測方法，其具有高效、快速、準確等特點。

本發明首先提供了一種用于檢測魚肉制品中巴丁魚成分的引物組合，包含 用于擴增包含巴丁魚COI基因中第一特異區段的核苷酸片段的第一引物對和 用于擴增包含巴丁魚COI基因中第二特征區段的核苷酸片段的第二引物對； 其中，所述巴丁魚COI基因的核苷酸序列為SEQ ID NO:1；所述第一特征區 段的核苷酸序列為SEQ ID NO:2

CCTTCTAGGCGACGACCAAATTTATAATGTTATTGTCACTGCCCATGCCTT CGTAATAATTTTCTTTATAGTAATACCAATTATAATTGGAGGCTTTGGAAAC TGACTTGTCCCCTTAATAATTGGAGCGCCTGATATGGCATTCCCTCGAATA AATAATATGAGTTTTTGATTACTTCCGCCTTCCTTCCTACTATTACTTGCCT CCTCTGGAGTAGAAGCAGGGGCAGGAACAGGATGAACTGTATATCCACC CCTTGCTGGAAAC；第二特征區段的核苷酸序列為SEQ ID NO:3

GCCTCCTAATTCGGGCAGAGCTAGCCCAACCCGGCGCCCTTCTAGGCGA CGACCAAATTTATAATGTTATTGTCACTGCCCATGCCTTCGTAATAATTTTC TTTATAGTAATACCAATTATAATTGGAGGCTTTGGAAACTGACTTGTCCCC TTAATAATTGGAGCGCCTGATATGGCATTCCCTCGAATAAATAATATGAGT TTTTGATTACTTCCGCCTTCCTTCCTACTATTGCTTGCCTCCTCTGGAG

在根據本發明的一個實施方案中，所述第一引物對包含SEQ ID NO:4和 SEQ IDNO:5。

在根據本發明的一個實施方案中，所述第二引物對包含SEQ ID NO:6和 SEQ IDNO:7。

在根據本發明的一個實施方案中，所述第一引物和/或第二引物還包含熒 光基團或顯色基團。