[發(fā)明專利]一種與特定短肽標(biāo)簽融合能高效催化Reb M生成的重組酶

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111481579.4
• 申請(qǐng)日: 2021-12-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114196696B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬媛媛;李亞桐;魏曉珍;汪振洋;宋浩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津大學(xué);中化健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12N15/75;C12N15/81;C12N15/54;C12N1/21;C12N1/19;C12N9/10;C12P19/56;C12P19/18;C12R1/19;C12R1/125;C12R1/84;C12R1/865
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 琪琛

1.一種重組載體，其特征在于：該重組載體為在糖基轉(zhuǎn)移酶UGT2表達(dá)載體的中含有特定短肽標(biāo)簽標(biāo)簽序列，所述重組載體核酸序列為：

a)SEQ ID NO.5-SEQ ID NO.8所示的任一核苷酸序列；或

b)與a)的核苷酸序列不同，能夠編碼SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4所示任一氨基酸序列的核苷酸序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體包括pPICZα-A/B/C、pPIC9K、pPIC9、pPinkα-HC、pHT01、pHT08、pHT43、pET系列載體、pMAL、pCOLD系列載體和pBAD系列載體中的任意一種。

3.一種重組菌，其特征在于，該重組菌中含有能夠編碼與特定短肽標(biāo)簽融合的UGT2的核酸序列的重組載體，所述重組載體核酸序列為：

a)SEQ ID NO.5-SEQ ID NO.8所示的任一核苷酸序列；或

b)與a)的核苷酸序列不同，能夠編碼SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4所示任一氨基酸序列的核苷酸序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組菌，其特征在于，所述重組菌的重組宿主包括埃希氏菌屬、巴斯德畢赤酵母菌、枯草芽孢桿菌中的任意一種。

5.權(quán)利要求3或4任意一項(xiàng)所述的重組菌的制備方法，其特征在于，將權(quán)利要求1所述的重組載體，轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，獲得重組菌。

6.與特定短肽標(biāo)簽融合的UGT2重組酶，其特征在于，所述重組酶包含SEQ ID NO.1-SEQID NO.4具有至少70％的序列同一性的氨基酸序列。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的重組酶，其特征在于：所述重組酶由權(quán)利要求3或權(quán)利要求4任意一項(xiàng)所述的重組菌誘導(dǎo)制備。

8.一種權(quán)利要求7所述的重組酶的制備方法，其特征在于，將權(quán)利要求5獲得的重組菌在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，加入誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)表達(dá)，所述誘導(dǎo)表達(dá)的溫度在18-30℃，誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間6-18h；所述方法還包括以下步驟：將誘導(dǎo)后菌液離心，收集菌體，破胞后離心得到重組酶。

9.權(quán)利要求1或2任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的重組載體或權(quán)利要求3或4任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的重組菌在制備能夠催化底物萊鮑迪苷D生成萊鮑迪苷M的重組酶中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，特征在于，以萊鮑迪苷D、UDPG、金屬離子和所述重組酶，構(gòu)建糖基化反應(yīng)體系，進(jìn)行糖基化反應(yīng)；或以萊鮑迪苷D、糖合酶、蔗糖底物、UDP、金屬離子和所述重組酶，構(gòu)建糖基化反應(yīng)體系，進(jìn)行糖基化反應(yīng)；所述糖基化反應(yīng)的溫度為18℃-50℃，糖基化反應(yīng)時(shí)間為1～48h，糖基化反應(yīng)體系的pH為5.0-10.5。