[發明專利]一種促進虎斑兜蘭種子無菌萌發及成苗的方法

有效

• 申請號: 202111471692.4
• 申請日: 2021-12-03
• 公開（公告）號: CN113951144B
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 楊穎婕;姚林伶;張石寶;黃家林
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明祥和知識產權代理有限公司 53114
• 代理人: 馬曉青

提供一種促進虎斑兜蘭種子無菌萌發及成苗的方法。該方法包括果莢采集與消毒、種子萌發、原球莖分化及生根等步驟。本發明通過優化培養基，在不同的發育階段設計不同的培養基，建立了虎斑兜蘭組培快繁體系，虎斑兜蘭的種子萌發率可達80%，成苗率可達94%，移栽半年后成活率可達90.5%。采用該方法，能實現虎斑兜蘭的大規模繁殖，對虎斑兜蘭種質資源的保護及利用具有重要的意義。

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，具件地，涉及兜蘭快繁，更具體地，涉及一種促進虎斑兜蘭種子無菌萌發及成苗的方法。

背景技術

兜蘭屬(Paphiopedilum)植物是世界著名的觀賞蘭花，因其花的唇瓣特化為兜狀又被稱為拖鞋蘭。目前，過度采集和生境喪失使得兜蘭屬的野生種群數量急劇減少，該屬的全部物種均被列入《野生動植物瀕危物種國際貿易公約(CITES)》附錄I，受到最高等級的保護。種苗繁育技術的解決對種質資源的保護利用具有重要意義。由于缺少胚乳，蘭科植物的種子在自然條件下萌發十分困難，通常需要共生真菌為其提供種子萌發所需的營養，自然萌發率不足5％。種子無菌萌發技術和無性克隆技術是蘭花主要的種苗人工繁育方式，但兜蘭屬植物的無性克隆非常困難，目前雖在技術上取得了一些進展，但仍不能投入商業應用。種子無菌萌發技術已經在多種兜蘭上取得成功，但是該技術的成苗率在種間的差異極大，有些物種的種子無菌萌發非常困難，如虎斑兜蘭(P.tigrinum)。曾宋君等(2011)對多種兜蘭進行無菌播種，除虎斑兜蘭、秀麗兜蘭(P.venustum)外均獲得了試管苗，可見虎斑兜蘭的種苗繁育之困難。虎斑兜蘭是一個商業價值很高的稀有物種，種苗繁育技術的欠缺極大地限制了其規模化的生產栽培及向原生地的回歸。攻克虎斑兜蘭的種子無菌萌發和成苗技術，將對特色珍稀種質資源的保護及利用具有重要的意義。

發明內容

本發明研發虎斑兜蘭從種子無菌萌發、原球莖分化、幼苗繼代、壯苗生根等各個階段最佳的培養基配方，以提高虎斑兜蘭的種子萌發率及成苗率，為虎斑兜蘭的保護回歸和大規模繁殖提供理論支持和技術支撐。

針對現有技術中虎斑兜蘭萌發率較低，成苗和生根困難的問題，本發明的目的在于提供一種虎斑兜蘭種子無菌萌發及成苗快繁的方法，大大提高了種子萌發率及成苗率。

本發明的上述目的是通過以下技術方案加于實現的：

一種促進虎斑兜蘭種子無菌萌發及成苗的方法，該方法包括以下步驟：

(1)果莢采集與消毒：選取虎斑兜蘭成熟未開裂的果莢，沖洗后，用0.1％升汞溶液浸泡10～15min，75％乙醇表面滅菌30s，酒精燈略微灼燒果莢后，置于無菌紙上備用；

(2)種子無菌萌發：在無菌紙上，將上述消過毒的果莢切開，均勻的撒于種子萌發培養基表面，種子在13～19天啟動萌發，3～6周為種子萌發的高峰期，第7周完成萌發，暗培養2～3個月后，得到白色、健康的原球莖；

(3)原球莖分化：將步驟(2)所得原球莖轉入原球莖分化培養基中，轉光培后下，原球莖逐漸轉綠，培養3～4個月，得到帶1～2片葉的小苗；

(4)幼苗繼代：將步驟(3)所得帶1～2片葉的小苗轉入小苗繼代培養基中，培養3～4個月，得到帶有2～3片葉的小苗；

(5)生根壯苗：將步驟(4)所得帶2～3片葉的小苗轉入生根壯苗培養基中，培養4～6個月，可得到帶4～5片葉、5～7條根、高約4cm的幼苗；

(6)幼苗的移栽：將步驟(5)所得幼苗至于溫室條件下煉苗2周，然后將植株從瓶中取出，洗凈幼苗根部附著的培養基，將其移入碎樹皮基質中培養。

根據一種促進虎斑兜蘭種子無菌萌發及成苗的方法，其中步驟(1)中虎斑兜蘭果莢沖洗采用肥皂水刷洗、自來水沖洗。