[發(fā)明專利]一種促進(jìn)虎斑兜蘭種子無(wú)菌萌發(fā)及成苗的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111471692.4
• 申請(qǐng)日: 2021-12-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113951144B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-11-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊穎婕;姚林伶;張石寶;黃家林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 昆明祥和知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 53114
• 代理人: 馬曉青

1.一種促進(jìn)虎斑兜蘭種子無(wú)菌萌發(fā)及成苗的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

（1）果莢采集與消毒：選取虎斑兜蘭成熟未開(kāi)裂的果莢，沖洗后，用0.1%升汞溶液浸泡10~15 min，75%乙醇表面滅菌30 s，酒精燈略微灼燒果莢后，置于無(wú)菌紙上備用；

（2）種子無(wú)菌萌發(fā)：在無(wú)菌紙上，將上述消過(guò)毒的果莢切開(kāi)，均勻的撒于種子萌發(fā)培養(yǎng)基表面，種子在13~19天開(kāi)始萌發(fā)，3~6周為種子萌發(fā)的高峰期，第7周完成萌發(fā)后，暗培養(yǎng)2~3個(gè)月，得到原球莖，所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基為：cHa+1 mg/L KT+0.1 g/L活性炭+ 100 mL/L椰乳+20 g/L蔗糖+6 g/L瓊脂；

（3）原球莖分化：將步驟（2）所得原球莖轉(zhuǎn)入原球莖分化培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)光培下，原球莖逐漸轉(zhuǎn)綠，培養(yǎng)3~4個(gè)月，得到帶1~2片葉的小苗，所述的原球莖分化培養(yǎng)基為：1/4 MS+2mg/LKT+0.3 g/L活性炭+50~100 mL/L椰乳+20 g/L蔗糖+6 g/L瓊脂；

（4）幼苗繼代：將步驟（3）所得帶1~2片葉的小苗轉(zhuǎn)入小苗繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3~4個(gè)月，得到帶有2~3片葉的小苗，所述的小苗繼代培養(yǎng)基為：1/2 MS+0.5~1.5 g/L活性炭+100 mL/L椰乳+20 g/L蔗糖+6 g/L瓊脂；

（5）生根壯苗：將步驟（4）所得帶2~3片葉的小苗轉(zhuǎn)入生根壯苗培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4~6個(gè)月，得到帶4~5片葉、5~7條根、高4~6cm的幼苗；所述的生根壯苗培養(yǎng)基為：1/2 MS + 15 g/L土豆 + 30 g/L香蕉 + 1.0 g/L活性炭 + 0.5 g/L白云石粉+20 g/L蔗糖+6 g/L瓊脂；

（6）幼苗的移栽：將步驟（5）所得幼苗至于溫室條件下煉苗2周，然后將植株從瓶中取出，洗凈幼苗根部附著的培養(yǎng)基，將其移入碎樹(shù)皮基質(zhì)中培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)虎斑兜蘭種子無(wú)菌萌發(fā)及成苗的方法，其特征在于，步驟（1）中虎斑兜蘭果莢沖洗采用肥皂水刷洗、自來(lái)水沖洗。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)虎斑兜蘭種子無(wú)菌萌發(fā)及成苗的方法，其特征在于，步驟（2）中所述的種子萌發(fā)在完全黑暗條件下培養(yǎng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)虎斑兜蘭種子無(wú)菌萌發(fā)及成苗的方法，其特征在于，步驟（3）、（4）、（5）均在溫度25±2°C，光照12h/d，光照1600~2000Lx條件下培養(yǎng)，步驟（6）環(huán)境溫度18~24℃，空氣相對(duì)濕度50~70%，遮光75~80%。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)虎斑兜蘭種子無(wú)菌萌發(fā)及成苗的方法，其特征在于，步驟（2）、（3）、（4）、（5）所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基、原球莖分化培養(yǎng)基、幼苗繼代培養(yǎng)基、生根壯苗培養(yǎng)基PH均在5.6~5.8之間。

6.一種促進(jìn)虎斑兜蘭種子無(wú)菌萌發(fā)及成苗的方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

（1）果莢采集與消毒：選取虎斑兜蘭成熟未開(kāi)裂的果莢，果莢經(jīng)肥皂水刷洗、自來(lái)水沖洗后，于超凈工作臺(tái)上用0.1%升汞溶液浸泡10~15 min，75%乙醇表面滅菌30 s，酒精燈略微灼燒果莢后，置于無(wú)菌紙上備用；

（2）種子無(wú)菌萌發(fā)階段：在無(wú)菌紙上，用手術(shù)刀將上述消過(guò)毒的果莢切開(kāi)，均勻的撒于種子萌發(fā)培養(yǎng)基表面，種子在13~19天啟動(dòng)萌發(fā)，3~6周為種子萌發(fā)的高峰期，第7周完成萌發(fā)；種子萌發(fā)在完全黑暗條件下培養(yǎng)，暗培養(yǎng)2~3個(gè)月后，得到白色、健康的原球莖，有效萌發(fā)率達(dá)82%；所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基為：cHa+1 mg/L KT+0.1 g/L活性炭+ 100 mL/L椰乳+20g/L蔗糖+6 g/L瓊脂，PH在5.6~5.8之間；

（3）原球莖分化階段：將上述原球莖轉(zhuǎn)入原球莖分化培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)光培后下，原球莖逐漸轉(zhuǎn)綠，培養(yǎng)3~4個(gè)月，得到帶1~2片葉的小苗，分化率達(dá)94%；所述原球莖分化培養(yǎng)基為：1/4MS+2mg/L KT+0.3 g/L活性炭+50~100 mL/L椰乳+20 g/L蔗糖+6 g/L瓊脂；在溫度25±2°C，光照12h/d，光照1600~2000Lx條件下培養(yǎng)，PH在5.6~5.8之間；

（4）幼苗繼代階段：將上述帶1~2片葉的小苗轉(zhuǎn)入小苗繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3~4個(gè)月，得到帶有2~3片葉的小苗，所述小苗繼代培養(yǎng)基為：1/2 MS+0.5~1.5 g/L活性炭+100 mL/L椰乳+20 g/L蔗糖+6 g/L瓊脂；在溫度25±2°C，光照12h/d，光照1600~2000Lx條件下培養(yǎng)，PH在5.6~5.8之間；

（5）生根壯苗階段：將上述帶2~3片葉的小苗轉(zhuǎn)入生根壯苗培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4~6個(gè)月，得到帶4~5片葉、5~7條根、高約4 cm的幼苗，所述生根壯苗培養(yǎng)基為：1/2 MS + 15 g/L土豆 +30 g/L香蕉 + 1.0 g/L活性炭 + 0.5 g/L白云石粉+20 g/L蔗糖+6 g/L瓊脂；在溫度25±2°C，光照12h/d，光照1600~2000Lx條件下培養(yǎng)，PH在5.6~5.8之間；

（6）幼苗的移栽：將上述幼苗置于溫室條件下煉苗2周，環(huán)境溫度18~24℃，空氣相對(duì)濕度50~70%，遮光75~80%，然后將植株從瓶中取出，洗凈幼苗根部附著的培養(yǎng)基，將其移入碎樹(shù)皮基質(zhì)中培養(yǎng)，移栽半年后成活率達(dá)90.5%。