[發明專利]一種高效表達GDH的工程菌株及其制備方法和應用在審
| 申請號： | 202111471201.6 | 申請日： | 2021-12-03 |
| 公開（公告）號： | CN114231475A | 公開（公告）日： | 2022-03-25 |
| 發明（設計）人： | 陳劍清;徐晨;唐文杰;王可盈;戴銳;呂正兵 | 申請（專利權）人： | 浙江清肽生物科技有限公司;浙江理工大學紹興生物醫藥研究院有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/53;C12N9/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 浙江納祺律師事務所 33257 | 代理人： | 鄭滿玉;王士祥 |
| 地址： | 312000 浙江省紹興市上虞區濱海新*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 高效 表達 gdh 工程 菌株 及其 制備 方法 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種高效表達GDH的工程菌，其特征在于：含有SEQ ID NO1所述序列的質粒。
2.一種如權利要求1所述的工程菌，其特征在于：所述工程菌利用大腸桿菌rosetta(DE3)作為宿主菌。
3.一種重組GDH蛋白，其特征在于：通過培養誘導如權利要求1或2所述的工程菌獲得。
4.一種如權利要求3所述重組GDH蛋白的純化方法，其特征在于該純化方法包含以下步驟：
A：誘導表達權利要求1或2所述的工程菌，菌液離心集菌后，超聲破碎，收集破碎后上清；
B：上清利用鎳柱親和層析；
C：超濾脫鹽，凍干保存。
5.根據權利要求4所述的重組GDH蛋白的純化方法，其體征在于：步驟B中鎳柱洗脫液采用咪唑，所述咪唑濃度為50-500mmol/L。
6.一種如權利要求1或2所述的工程菌在制備GDH產品中的應用。
7.一種如權利要求3所述的重組GDH蛋白在制備GDH產品中的應用。
8.一種如權利要求4所述的重組GDH蛋白的純化方法在制備GDH產品中的應用。
9.一種高效表達GDH的工程菌的構建方法，其特征在于該構建方法包括如下步驟：將GDH原始基因構建到PET-14b質粒中，轉化大腸桿菌Rosetta，培養基培養，獲得高效表達GDH的工程菌。
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