[發明專利]鑒別無籽油棕的SSR標記引物、應用及方法

有效

• 申請號: 202111470335.6
• 申請日: 2021-12-03
• 公開（公告）號: CN113981131B
• 公開（公告）日: 2023-06-20
• 發明（設計）人: 石鵬;張大鵬;王永
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院椰子研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 海口翔翔專利事務有限公司 46001
• 代理人: 張耀婷

1.鑒別無籽油棕的SSR標記引物，其特征在于：包括兩對引物組，分別為P16和P19；所述P16引物的正向引物的序列如SEQ?ID?NO.1所示，反向引物的序列如SEQ?ID?NO.2所示，所述P19引物的正向引物的序列如SEQ?ID?NO.3所示，反向引物的序列如SEQ?ID?NO.4所示。

2.根據權利要求1所述的鑒別無籽油棕的SSR標記引物在育苗階段對油棕的無籽性狀進行早期鑒定中的應用。

3.一種利用權利要求1所述的SSR標記引物鑒別無籽油棕的方法，其特征在于，步驟如下：

步驟S1，取0.05-0.1g油棕葉片提取基因組DNA，稀釋濃度到200ng/μl；

步驟S2，配制20ul反應體系對DNA進行PCR擴增，擴增方式為梯度降落法，擴增條件為：94?C變性5?min，94?C變性30s，退火溫度從65??降到56?C，運行10個循環，每個循環降低1??C，55?C退火25個循環，每個循環45?s，72?C延伸1?min，最后72?C?延伸10?min，之后4?C保存；

步驟S3，PCR產物中加入1μl?6×染料混合，取0.8-1.0?μl混合液，在6%聚丙烯酰胺凝膠上點樣，電泳后銀染，觀察250-500bp之間的條帶情況進行無籽油棕鑒定：250-500bp之間有條帶的為有籽油棕，沒有條帶的為無籽油棕；

步驟S2中，反應體系包含1μl?基因組DNA，0.4?μl?dNTPs，2?μl含有MgCl₂的10×RealTimes?buffer，2?μl?RealTimes?Taq?DNA聚合酶?5?U?μl^-1，0.8?μl正向引物?10?μM，0.8?μl反向引物10?μM，13?μl滅菌超純水。