[發明專利]荷丹片液質聯用測定方法

在審

• 申請號: 202111469916.8
• 申請日: 2021-12-03
• 公開（公告）號: CN114113403A
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 曾英姿;周萬輝;趙磊
• 申請（專利權）人: 南昌濟順制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為;李旭

1.一種荷丹片液質聯用測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)對照品溶液的配制：

將補骨脂苷、異補骨脂苷、金絲桃苷、槲皮素3-O-葡萄糖醛酸苷、異槲皮苷、番瀉苷B、紫云英苷、番瀉苷A、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、荷葉堿、丹酚酸A、補骨脂素、異補骨脂素、丹酚酸C、大黃酸、新補骨脂異黃酮、補骨脂寧、隱丹參酮、補骨脂酚作為對照品，配制成對照品溶液；

2)供試品溶液的配制：

將荷丹片粉碎后用溶劑將有效成份溶出；

3)測定：

將對照品溶液和供試品溶液注入注入液質聯用儀中，得到色譜圖；

4)，根據色譜圖計算供試品溶液中補骨脂苷、異補骨脂苷、金絲桃苷、槲皮素3-O-葡萄糖醛酸苷、異槲皮苷、番瀉苷B、紫云英苷、番瀉苷A、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、荷葉堿、丹酚酸A、補骨脂素、異補骨脂素、丹酚酸C、大黃酸、新補骨脂異黃酮、補骨脂寧、隱丹參酮、補骨脂酚的含量。

其中，所述色譜條件如下：液相色譜條件Agilent C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，流速0.4mL·min-1，進樣體積2μL。柱溫30℃，流動相0.2％磷酸水溶液(A)-乙腈(B)作為流動相，進行梯度洗脫，梯度洗脫過程如下：

質譜條件：電噴霧離子源(ESI)，正、負離子模式下分別掃描。正離子模式干燥氣溫度350℃，毛細管電壓35V，噴霧電壓3.4kV，干燥氣流速：10L/min，干燥氣壓力：35psi；負離子模式干燥氣溫度400℃，毛細管電壓-35V，噴霧電壓-3.4kV，干燥氣流速：10L/min，干燥氣壓力：35psi；檢測方式：多反應監測(MRM)。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，其中，步驟1)所述對照品溶液的配制包括以下步驟：

取補骨脂苷、異補骨脂苷、金絲桃苷、槲皮素3-O-葡萄糖醛酸苷、異槲皮苷、番瀉苷B、紫云英苷、番瀉苷A、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、荷葉堿、丹酚酸A、補骨脂素、異補骨脂素、丹酚酸C、大黃酸、新補骨脂異黃酮、補骨脂寧、隱丹參酮、補骨脂酚對照品適量，精密稱定，分別置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解定容，配制成濃度分別為：227.6μg/mL、128.3μg/mL、169.5μg/mL、248.4μg/mL、135.7μg/mL、185.3μg/mL、119.2μg/mL、84.2μg/mL、193.8μg/mL、74.8μg/mL、236.1μg/mL、149.3μg/mL、106.2μg/mL、196.4μg/mL、125.8μg/mL、62.7μg/mL、174.8μg/mL、58.3μg/mL、44.2μg/mL、138.3μg/mL、96.4μg/mL的對照品儲備液。

3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，其中，步驟1)所述對照品溶液的配制，進一步包括以下步驟：

取補骨脂苷、異補骨脂苷、金絲桃苷、異槲皮苷、荷葉堿、補骨脂素、異補骨脂素、新補骨脂異黃酮、補骨脂寧、隱丹參酮的對照品儲備液制得混合對照品溶液A。

4.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，其中，步驟1)所述對照品溶液的配制，進一步包括以下步驟：

取槲皮素3-O-葡萄糖醛酸苷、番瀉苷B、紫云英苷、番瀉苷A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹酚酸C、大黃酸、補骨脂酚的對照品儲備液制得混合對照品溶液B。

5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，其中，步驟2)所述供試品溶液的配制，步驟如下：取荷丹片，粉碎，稱取約0.5g，精密稱定，置于25mL容量瓶中，加入適量甲醇，超聲處理15min，放冷，用甲醇定容至刻度線，密塞搖勻，取適量12000rpm離心10min，精密移取上清液5mL至10mL容量瓶中，加50％甲醇定容至刻度，混勻，即得供試品溶液。

6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，其中，步驟2)所述測定，方法如下：

吸取混合對照品溶液A、B與供試品溶液，注入液質聯用儀中，其中A在正離子模式，B負離子模式在得到質譜圖。