[發明專利]Akt1磷酸化PMS2蛋白在作為卵巢癌治療靶點中的應用

在審

• 申請號: 202111465491.3
• 申請日: 2021-12-01
• 公開（公告）號: CN114150062A
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發明（設計）人: 高芳芳
• 申請（專利權）人: 鄭州大學第三附屬醫院（河南省婦幼保健院）
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/02;G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 王峰剛

1.一種Akt1磷酸化PMS2蛋白在作為卵巢癌治療靶點中的應用。

2.一種實施如權利要求1所述的Akt1磷酸化PMS2蛋白在作為卵巢癌治療靶點中的應用的鑒定Akt1磷酸化PMS2蛋白作為卵巢癌治療靶點的方法，所述鑒定Akt1磷酸化PMS2蛋白作為卵巢癌治療靶點的方法包括以下步驟：

步驟一，通過Western Blot檢測活化Akt1和p-PMS2關系；

步驟二，檢測p-PMS2 T156下調后卵巢癌細胞遷移能力的變化；

步驟三，檢測p-PMS2 T156下調后卵巢癌細胞侵襲能力的變化；

步驟四，通過平板克隆法檢測轉染PMS2-T156A后卵巢癌細胞克隆形成能力的變化；

步驟五，通過流式細胞儀及WesternBlot檢測轉染PMS2-T156A卵巢癌細胞凋亡的影響。

3.如權利要求2所述的鑒定Akt1磷酸化PMS2蛋白作為卵巢癌治療靶點的方法，其特征在于，步驟一中，所述通過WesternBlot檢測活化Akt1和p-PMS2關系，包括：

(1)通過Western Blot檢測卵巢癌細胞系p-Akt S473和p-PMS2 T156的表達情況；

(2)通過WesternBlot檢測突變質粒PMS2-T156A轉染效果；

(3)上調Akt1活性后，檢測p-PMS2 T156表達情況。

4.如權利要求3所述的鑒定Akt1磷酸化PMS2蛋白作為卵巢癌治療靶點的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述通過Western Blot檢測卵巢癌細胞系p-Akt S473和p-PMS2 T156的表達情況，包括：

通過Western Blot法檢測4種卵巢癌細胞株中P-Akt S473和p-PMS2 T156的表達情況，因Hela細胞中存在正常的MMR功能和異常活化的Akt1而作為陽性對照。

5.如權利要求3所述的鑒定Akt1磷酸化PMS2蛋白作為卵巢癌治療靶點的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述通過Western Blot檢測突變質粒PMS2-T156A轉染效果，包括：

選取p-PMS2 T156高表達的A2780和SKOV3作為轉染對象，通過Western Blot驗證轉染效果。

6.如權利要求3所述的鑒定Akt1磷酸化PMS2蛋白作為卵巢癌治療靶點的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述上調Akt1活性后，檢測p-PMS2 T156表達情況，包括：

選取A2780和SKOV3細胞作為實驗對象，加入Akt1活化劑IGF-1上調p-Akt S473的表達，通過Western Blot法檢測，驗證Akt1對PMS2的作用。

7.如權利要求2所述的鑒定Akt1磷酸化PMS2蛋白作為卵巢癌治療靶點的方法，其特征在于，步驟二中，所述檢測p-PMS2 T156下調后卵巢癌細胞遷移能力的變化，包括：

細胞劃痕實驗轉染PMS2-T156A后A2780和SKOV3遷移能力的改變，計算兩細胞系各組劃痕間隙融合率，間隙融合率＝(起始時間間隙寬度-終止觀察時間間隙寬度)/起始時間間隙寬度；

步驟三中，所述檢測p-PMS2 T156下調后卵巢癌細胞侵襲能力變化，包括：

通過transwell檢測轉染PMS2-T156A后A2780和SKOV3細胞侵襲能力的改變，計數膜中央部分和周圍部分隨機視野X100內侵襲細胞的數目；

步驟四中，所述通過平板克隆法檢測轉染PMS2-T156A后卵巢癌細胞克隆形成能力的變化，包括：

六孔板細胞培養10～14天后觀察，將直徑為3.5cm的六孔板分成若干10mm×10mm視野，隨機選擇4個視野計算細胞克隆數。