[發明專利]一種以茶樹帶腋芽莖段為外植體建立高效快繁體系的方法

在審

• 申請號: 202111457252.3
• 申請日: 2021-12-02
• 公開（公告）號: CN114051932A
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 李巖;陳雨露;呂立堂;金炯亦;張芬
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 西安合創非凡知識產權代理事務所(普通合伙) 61248
• 代理人: 支思迪

1.一種以茶樹帶腋芽莖段為外植體建立高效快繁體系的方法，其特征在于：包括如下步驟：

S1、外植體消毒：4-5月，摘取茶樹植株鮮嫩的帶腋芽莖段，消毒處理后，將其切成每段有1～2個腋芽的莖段；

S2、腋芽萌發：將完成消毒的莖段上端平切下端斜切，切掉葉柄后，接種到添加有2mg.L^-1的6-BA、0.9 mg.L^-1的NAA的WPM基本培養基上，進行腋芽萌發及培養；

S3、腋芽增殖：待腋芽萌發到2.8 cm時，將腋芽切下，基部斜切，接種到添加有3.5 mg.L^-1的6-BA和0.8mg.L^-1的2,4-D的WPM培養基上進行增殖叢生芽；

S4、壯苗：將長勢基本一致的叢生芽剪成 1～3 株單芽，接種至添加有2 mg.L^-1 6-BA和0.6 mg.L^-1 2,4-D的WPM培養基上進行壯苗培養；

S5、組培苗的生根和移栽：待無根苗平均高度約5 cm后，接種至1/2MS的生根培養基上進行培養，待根系長出后，將組培苗煉苗移栽。

2.如權利要求1所述的一種以茶樹帶腋芽莖段為外植體建立高效快繁體系的方法，其特征在于：所述的步驟S1中，消毒處理時，剪取茶樹植株中鮮嫩的帶腋芽莖段7～8 cm，剪去葉片保留部分葉柄；在洗潔劑溶液中浸泡8 min ，自來水反復沖洗0.5 h 以上后；在0.5%多菌靈溶液中浸泡10min，自來水沖洗3 h 以上，浸泡期間不斷攪拌；放入超凈工作臺，用75%的酒精浸泡消毒2min，無菌水清洗4次；再用20%的次氯酸鈉溶液浸泡13min，無菌水沖洗7次，無菌吸水紙吸去表面水分，切成含有1～2個腋芽的單個莖段，用于接種。

3.如權利要求1所述的一種以茶樹帶腋芽莖段為外植體建立高效快繁體系的方法，其特征在于：所述的步驟S2中，腋芽萌發的WPM培養基的pH=5.80，萌發培養時間為50d。

4.如權利要求1所述的一種以茶樹帶腋芽莖段為外植體建立高效快繁體系的方法，其特征在于：所述的步驟S3中，腋芽增殖的WPM培養基的pH=5.80，增殖培養時間為45d。

5.如權利要求1所述的一種以茶樹帶腋芽莖段為外植體建立高效快繁體系的方法，其特征在于：所述的步驟S4中，壯苗的WPM培養基的pH=5.80，壯苗培養時間為45d。

6.如權利要求1所述的一種以茶樹帶腋芽莖段為外植體建立高效快繁體系的方法，其特征在于：所述的步驟S5中，生根培養基為1/2 MS基本培養基中加入1.4 mg.L^-1的IBA后配置所得，接種前用生根粉浸泡8min，培養基的pH=5.80，生根培養65d，根系長出后，植株煉苗時間為6 d，移栽所用基質由黃土：蛭石：珍珠巖按質量比2：1：1的比例均勻混合所得。

7.如權利要求1所述的一種以茶樹帶腋芽莖段為外植體建立高效快繁體系的方法，其特征在于：植物組織培養各個階段的培養條件均為光照強度為2 100 lx，每日光照12 h，培養溫度(23±2)℃。