[發明專利]一種以茶樹帶腋芽莖段為外植體建立高效快繁體系的方法

在審

• 申請號: 202111457252.3
• 申請日: 2021-12-02
• 公開（公告）號: CN114051932A
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 李巖;陳雨露;呂立堂;金炯亦;張芬
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 西安合創非凡知識產權代理事務所(普通合伙) 61248
• 代理人: 支思迪

本發明涉及植物組織培養技術領域，具體涉及一種以茶樹帶腋芽莖段為外植體建立高效快繁體系的方法，包括如下步驟：4?5月，摘取茶樹植株鮮嫩的帶腋芽莖段，消毒處理后，將其切成每段有1～2個腋芽的莖段，上端平切下端斜切，切掉葉柄后，接種到腋芽萌發培養基上，進行腋芽萌發及培養，待腋芽萌發到2.8 cm時，將腋芽切下，基部斜切，接種到腋芽增殖培養基上進行增殖叢生芽；將長勢基本一致的叢生芽剪成1～3株單芽，接種至壯苗培養基上進行壯苗培養；待無根苗平均高度約5 cm后，接種至1/2MS的生根培養基上進行培養，待根系長出后，將組培苗煉苗移栽。本發明實現了茶樹高效的快繁體系，為建立茶樹工廠化育苗提供技術支撐。

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，具體涉及一種以茶樹帶腋芽莖段為外植體建立高效快繁體系的方法。

背景技術

茶是世界上最古老，最受歡迎的含咖啡因的飲料，具有極大的經濟、藥用和文化價值。茶樹( Camellia sinensis)為山茶科山茶屬灌木或小喬木，多年生木本植物， 茶樹的葉子可制茶，因此茶樹苗木具有極大的需求量。茶樹繁殖通常是扦插和籽播，傳統的扦插具有所需原材料多、成活率低、偏冠現象等較多缺點，而籽播也具有需求量大、萌發時間長、萌發率低等問題，因此不能在短時間內提供大量的苗木。

自茶樹組織培養技術開展，國內外學者通過茶樹不同類型外植體培養成功建立茶樹組培快繁體系。在茶樹組培快繁研究中，腋芽培養為離體培養中常用的類型, 其在連續培養中能產生更多的叢生芽, 且發育生長得較好, 具有穩定的遺傳特性和較高的繁殖系數。植物組織培養具有所需原材料少、不受季節與有害生物限制、品種穩定遺傳、繁殖系數高、培養周期短等優點，能在短時間內提供大量的苗木，利用組培技術能夠在短期內解決茶樹工廠化育苗和規?；N植的問題。

發明內容

本發明提供了一種以茶樹帶腋芽莖段為外植體建立高效快繁體系的方法，實現了茶樹高效的快繁體系，為建立茶樹工廠化育苗提供技術支撐。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

一種以茶樹帶腋芽莖段為外植體建立高效快繁體系的方法，包括外植體消毒、腋芽萌發、腋芽增殖、壯苗和無根苗生根五個階段，具體的，包括如下步驟：

S1、外植體消毒：4-5月，摘取茶樹植株鮮嫩的帶腋芽莖段，本實驗選取的是云南大理茶古茶樹L32株系為材料，在超凈臺中進行莖段消毒處理后，將其切成每段有1～2個腋芽；

S2、腋芽萌發：將完成消毒的莖段上端平切下端斜切，切掉葉柄后，接種到添加有2mg.L^-1的6-BA、0.9 mg.L^-1的NAA的WPM基本培養基上，進行腋芽萌發及培養；

S3、 腋芽增殖：待腋芽萌發到2.8 cm左右時，將腋芽切下，基部斜切，接種到添加有3.5 mg.L^-1的6-BA和0.8mg.L^-1的2,4-D的WPM培養基上進行增殖叢生芽；

S4、壯苗：將長勢基本一致的叢生芽剪成 1～3 株單芽，接種至添加有2 mg.L^-1 6-BA 和0.6 mg.L^-1 2,4-D的WPM培養基上進行壯苗培養；

S5、組培苗的生根和移栽：待無根苗平均高度約5 cm 左右后，接種至1/2MS的生根培養基上進行培養，待根系長出后，將組培苗煉苗移栽。

進一步地，所述的步驟S1中，消毒處理時，剪取茶樹植株中鮮嫩的帶腋芽莖段7～8cm，剪去葉片保留部分葉柄；在洗潔劑溶液中浸泡8 min ，自來水反復沖洗0.5 h 以上后；在0.5%多菌靈溶液中浸泡10min，自來水沖洗3 h 以上，浸泡期間不斷攪拌；放入超凈工作臺，用75%的酒精浸泡消毒2min，無菌水清洗4次；再用20%的次氯酸鈉溶液浸泡13min，無菌水沖洗7次，無菌吸水紙吸去表面水分，切成含有1～2個腋芽的單個莖段，用于接種。

進一步地，所述的步驟S2中，腋芽萌發的WPM培養基的pH=5.80，萌發培養時間為50d。