[發明專利]納米熒光標記微球、PGⅠ/PGⅡ單克隆抗體探針以及PGⅠ/PGⅡ檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202111456399.0
• 申請日: 2021-12-01
• 公開（公告）號: CN116254103A
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發明（設計）人: 張國華;顧曉丹;黃玉瑩
• 申請（專利權）人: 上海凱創生物技術有限公司
• 主分類號: C09K11/02
• 分類號: C09K11/02;C09K11/06;G01N33/533;G01N33/573;G01N33/577;G01N33/58
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 安盼盼

1.一種納米熒光標記微球，其特征在于，所述納米熒光標記微球為由羧基修飾的銪鋱配合物，所述納米熒光標記微球的直徑為0.2μm；

所述納米熒光標記微球的制備方法包括如下步驟：

(一)稀土混合溶液的制備：將氧化銪與氧化鋱按Eu³⁺與Tb³⁺的摩爾比為(20～500):1混合后，溶于質量濃度為0.5%的鹽酸中，加熱除去多余鹽酸，在加熱攪拌回流的條件下溶解于乙醇中，得到稀土混合溶液；

(二)配體A溶液的制備：在加熱攪拌回流的條件下將配體A溶于乙醇中，得到配體A溶液；

其中，配體A為氟化物、復合氧化物、碳酸鹽、鈦酸鹽、草酸鹽和釩酸鹽中的一種或多種；

配體A的摩爾數與步驟(一)中Eu³⁺與Tb³⁺總摩爾數的比值為1:(3～4)；

(三)表面功能化修飾：在不斷攪拌的條件下將步驟(一)得到的稀土混合溶液和步驟(二)得到的配體A溶液混合，并在惰性氣體保護氛圍下加熱至140～150℃，保溫攪拌1～1.5h后，以3～5℃/min的升溫速率升溫至220～230℃，保溫攪拌2～4h后，冷卻至100～120℃，加入配體B，再次加熱至220～230℃保溫攪拌6～8h，自然冷卻，在10000～20000rpm轉速下離心8～10min，依次用乙醇和去離子水洗滌沉淀，再次重復離心和洗滌過程2～3次，真空干燥，即得；

其中，配體B為至少含有一個羧基的有機物；

配體B的摩爾數與步驟(一)中Eu³⁺與Tb³⁺總摩爾數的比值為1:(105～110)。

2.根據權利要求1所述的納米熒光標記微球，其特征在于，步驟(一)中，氧化銪與氧化鋱按Eu³⁺與Tb³⁺的摩爾比為100:1混合。

3.根據權利要求1所述的納米熒光標記微球，其特征在于，步驟(二)中，配體A的摩爾數與步驟(一)中Eu³⁺與Tb³⁺總摩爾數的比值為1:4。

4.根據權利要求1所述的納米熒光標記微球，其特征在于，步驟(三)中，配體B的摩爾數與步驟(一)中Eu³⁺與Tb³⁺總摩爾數的比值為1:108。

5.一種PGⅠ/PGⅡ單克隆抗體探針，其特征在于，由PGⅠ/PGⅡ單克隆抗體負載在權利要求1-4任一項所述的納米熒光標記微球而得。

6.權利要求5所述PGⅠ/PGⅡ單克隆抗體探針的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1，將權利要求1-4任一項所述的納米熒光標記微球與活化緩沖液混勻，離心獲得微球沉淀a；

S2，用耦聯緩沖液將微球沉淀a超聲復懸，得到微球溶液a；

S3，向微球溶液a中加入NHS和EDC，混合反應0.8～1.2h后，離心獲得微球沉淀b；

S4，用耦聯緩沖液將微球沉淀b超聲復懸，得到微球溶液b；

S5，向微球溶液b中加入PGⅠ/PGⅡ單克隆抗體，混勻反應2.8～3.2h，離心獲得微球沉淀c；

S6，用封閉緩沖液將微球沉淀c超聲復懸，即得。

7.根據權利要求6所述的PGⅠ/PGⅡ單克隆抗體探針的制備方法，其特征在于，步驟S3中，NHS的加入量為0.2～1mg/mL微球溶液a；EDC的加入量為0.04～0.2mg/mL微球溶液a。

8.根據權利要求6所述的PGⅠ/PGⅡ單克隆抗體探針的制備方法，其特征在于，步驟S5中，PGⅠ/PGⅡ單克隆抗體的加入量為1～5mg/mL微球溶液b。

9.一種PGⅠ/PGⅡ檢測試劑盒，其特征在于，包括PGⅠ/PGⅡ檢測試劑卡，所述PGⅠ/PGⅡ檢測試劑卡包被有權利要求5所述的PGⅠ/PGⅡ單克隆抗體探針。

10.根據權利要求9所述的PGⅠ/PGⅡ檢測試劑盒，其特征在于，檢測PGⅠ抗原的靈敏度可達0.5ng/mL，線性范圍0～500ng/mL，相關系數R²＞0.999，CV＜4.5%；檢測PGⅡ抗原的靈敏度可達0.5ng/mL，線性范圍0～500ng/mL，相關系數R²＞0.99，CV＜6.0%。