[發明專利]一種電化學底液放大的免疫檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 202111451237.8
• 申請日: 2021-11-30
• 公開（公告）號: CN116203227A
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 李長明;鄒卓;劉峰;張嫄媛;史轉轉
• 申請（專利權）人: 蘇州科技大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/58;G01N27/48;G01N27/30
• 代理公司: 重慶航圖知識產權代理事務所(普通合伙) 50247
• 代理人: 胡小龍;朱嬌艷

本發明公開了一種電化學免疫的方法及應用，該方法具體是將修飾第一抗體的傳感電極與抗原共孵育使第一抗體與待測抗原相遇，使待測抗原與第一抗體結合，通入清洗溶液清洗未結合的樣品，然后加入電化學酶標抗體共孵育，使電化學酶標抗體與已與第一抗體結合的抗原結合形成三明治結構，通入清洗溶液清洗未結合的電化學酶標抗體后，然后加入底物液，進行酶催化反應將底物轉化為電化學活性產物，在設定的電極電位下發生電化學反應釋放電子，通過測定電流值實現抗原檢測；該方法具有靈敏度高、穩定性好、重復性好、易于控制等優點，在臨床、法醫學、環境和醫藥等領域具有巨大的應用潛力。

技術領域

本發明涉及檢測領域，具體涉及一種電化學底液放大的免疫檢測方法，還涉及基于電化學免疫檢測抗原的試劑盒。

背景技術

自20世紀70年代以來，特異性免疫反應與靈敏的光學或電化學轉導的結合引起了人們的廣泛關注。由于電化學傳感技術對微型化、可移動性的適應性，引起了廣泛的重視和研究。構建電化學免疫傳感器的關鍵步驟之一是選擇合適的探針固定和信號放大方法。最廣泛使用的方法是基于微球的固定化技術，使探針被物理吸附或共價結合到帶磁性鐵芯的聚苯乙烯微球表面。雖然這種方法靈敏度高，但這種方法不能提供具有可控空間分辨率的相關免疫試劑，從而限制了其在生物芯片中的應用。另一種替代方法是使用電聚合導體聚合物作為固定化免疫試劑的基質。在福洛斯的開創性工作之后，生物分子如酶、DNA、抗體甚至整個細胞在導電聚合物中的固定化已被廣泛應用于制造生物傳感器，包括免疫傳感器。為提高檢測靈敏度，在酶聯免疫法中的抗體可以用DNA功能化的納米結構標記，該DNA標記的功能化材料可以通過聚合酶鏈式反應、雜交鏈式反應或者滾環擴增技術實現信號放大，通過該項技術，免疫反應的靈敏度與傳統的酶聯免疫法相比，可以提高多個數量級。在基于DNA信號放大的酶聯免疫法中，催化發夾DNA探針自組裝反應和雜交鏈式反應的放大程度有限；聚合酶鏈式反應雖信號放大程度高，但是其反應過程需要嚴格的升溫和降溫過程，限制了其擴大應用。比較而言，滾環擴增放大技術具有獨特的優勢，它采用等溫擴增，可以實現信號分子10⁵到10⁹甚至是指數數量級的放大。但是同樣需要復雜的溫度控制設備，因此限制了使用給地域和環境。

因此，亟需一種靈敏度高、不需要附加設備，儲存條件要求低，可在多種環境中使用的檢測方法和產品。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種電化學免疫檢測的方法；本發明的目的之二在于提供基于電化學免疫檢測抗原的試劑盒。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

1、一種電化學底液放大的免疫檢測方法，包括如下步驟：

1)在傳感電極上修飾特異識別待測抗原的抗體作為第一抗體；

2)將傳感電極與待測物共孵育使第一抗體與待測物相遇，如待測物有與第一抗體配對的抗原，抗原與第一抗體結合，通入清洗溶液清洗未結合的樣品，然后通入與所述抗原匹配的電化學酶標抗體作為第二抗體共孵育，使電化學酶標抗體與已與第一抗體結合的抗原結合形成三明治結構，通入清洗溶液清洗未結合的電化學酶標抗體后，然后加入底物液，進行酶催化反應將底物轉化為電化學活性產物，通過以參比電極為基準向傳感電極施加電壓，電化學活性產物釋放產生電子同時產生反應產物，通過測定電流值實現抗原檢測，通過調高底物濃度放大檢測信號。

本發明優選的，所述抗原為但不限于蛋白質、細菌、病毒、細菌外毒素、多糖和類脂中的一種或多種。

本發明優選的，所述清洗溶液為但不限于PBS。

本發明優選的，所述電化學酶為但不限于堿性磷酸酶；所述底物為但不限于含氨基苯基磷酸酯的PBS溶液或含氨基苯基磷酸酯的碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液。

本發明優選的，所述傳感電極的材料為但不限于金屬、金屬氧化物、金屬碳化物、導電塑料、導電聚合物、碳材料或其組合物或混合物。