[發明專利]一種電化學底液放大的免疫檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 202111451237.8
• 申請日: 2021-11-30
• 公開（公告）號: CN116203227A
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 李長明;鄒卓;劉峰;張嫄媛;史轉轉
• 申請（專利權）人: 蘇州科技大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/58;G01N27/48;G01N27/30
• 代理公司: 重慶航圖知識產權代理事務所(普通合伙) 50247
• 代理人: 胡小龍;朱嬌艷

1.一種電化學底液放大的免疫檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)在傳感電極上修飾特異識別待測抗原的抗體作為第一抗體；

2)將傳感電極與待測物共孵育使第一抗體與待測物相遇，如待測物有與第一抗體配對的抗原，抗原與第一抗體結合，通入清洗溶液清洗未結合的樣品，然后通入與所述抗原匹配的電化學酶標抗體作為第二抗體共孵育，使電化學酶標抗體與已與第一抗體結合的抗原結合形成三明治結構，通入清洗溶液清洗未結合的電化學酶標抗體后，然后加入底物液，進行酶催化反應將底物轉化為電化學活性產物，通過以參比電極為基準向傳感電極施加電壓，電化學活性產物釋放產生電子同時產生反應產物，通過測定電流值實現抗原檢測，通過調高底物濃度放大檢測信號。

2.根據權利要求1所述電化學底液放大的免疫檢測方法，其特征在于：所述抗原為但不限于蛋白質、細菌、病毒、細菌外毒素、多糖和類脂中的一種或多種。

3.根據權利要求1所述一種電化學免疫的方法，其特征在于：所述清洗溶液為但不限于PBS。

4.根據權利要求1所述電化學底液放大的免疫檢測方法，其特征在于：所述電化學酶為但不限于堿性磷酸酶；所述底物為但不限于含氨基苯基磷酸酯的PBS溶液或含氨基苯基磷酸酯的碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液。

5.根據權利要求1所述電化學底液放大的免疫檢測方法，其特征在于：所述傳感電極的材料為但不限于金屬、金屬氧化物、金屬碳化物、導電塑料、導電聚合物、碳材料或其組合物或混合物。

6.根據權利要求1所述電化學底液放大的免疫檢測方法，其特征在于：所述傳感電極設置為能夠同時檢測至少一個待測抗原的微流控陣列芯片。

7.根據權利要求1所述電化學底液放大的免疫檢測方法，其特征在于：所述微流控陣列芯片外接進樣系統，并通過控制系統控制樣品進樣、信號采集、數據傳輸和數據處理。

8.根據權利要求1所述電化學底液放大的免疫檢測方法，其特征在于：所述檢測后還包括底物回收步驟，具體是將反應液中的反應產物分離，然后由反向電極還原生成電化學活性產物，并進行回收。

9.根據權利要求1所述電化學底液放大的免疫檢測方法，其特征在于：所述電化學酶標抗體的方法如下：將傳感電極暴露于含第一抗體的溶液中至少30分鐘，然后用PBS洗滌和質量分數1％的BSA處理30分鐘以上，減輕非特異性蛋白的吸附。

10.根據權利要求1所述電化學底液放大的免疫檢測方法，其特征在于：所述控制系統為ARM架構的STM32微處理器作為核心芯片搭建而成。

11.權利要求1～10任一項所示所述電化學底液放大的免疫檢測方法的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括抗體修飾傳感電極、PBS清洗液、電化學酶標抗體和底物；所述電化學酶為堿性磷酸酶；所述底物為含氨基苯基磷酸酯的PBS溶液或含氨基苯基磷酸酯的碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液。