[發(fā)明專利]用于結(jié)直腸癌易感基因SNP檢測的引物、檢測方法和試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111451110.6
• 申請日: 2021-12-01
• 公開（公告）號: CN114107505A
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張怡然;張騰龍;楊春燕;段小紅;馬云;王東亮
• 申請（專利權(quán)）人: 求臻醫(yī)學(xué)科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50219
• 代理人: 陳付玉

1.用于結(jié)直腸癌易感基因SNP檢測的引物，其特征在于：包括與結(jié)直腸癌高度相關(guān)的9對特異性引物及9個延伸引物；其中所述9對特異性引物的序列如下：

Sea ID NO.1：F-CTCCTGAGTAGCTGGGATTACAGGT，

Seq ID NO.2：R-ATCACTTCAGGTCAGGAGTTCAAAACCA；

Seq ID NO.3：F-CAGTGTGGTGCAGTGGTTAGAGCAT，

Seq ID NO.4：R-ACTTTATATCCAAGGAGGCCTGACACA；

Sea ID NO.5：F-TGCAGCACTTAACGCAGTGTCCTC，

Seq ID NO.6：R-AATCGATAGTGGGTATGTATAAAGTGCGTA；

Seq ID NO.7：F-TGTGTAACAGACGTCACCTTCAGC，

Seq ID NO.8：R-GGTTTCTCTGTATCCCTATGTAAAGGACT；

Sea ID NO.9：F-GATAGAGAGTTTCTAATCCTTTGGTGA，

Seq ID NO.10：R-CTACATTTGGATATCTGTGAACCTT；

Seq ID NO.11：F-TCTGGTGCTCATTTCCTTCCAGTGGGACA，

Sea ID NO.12：R-ATGCCAGCTGCCATTGTGATGGGA；

Sea ID NO.13：F-TCATGGAAAGAGTATTGATTTATGCC，

Seq ID NO.14：R-TAAACCTGTGTTGTATTTAATCAAGTT；

Seq ID NO.15：F-AGTGAGCTGTGATCATGCCAAGGTACT，

Sea ID NO.16：R-TGAGCCCTGGCCCACAGAACGAGA；

Sea ID NO.17：F-ATAGGAAATCACAAGGGTATTGACTGG，

Seq ID NO.18：R-TTTCATGGACATGTATTAGTTCCCCAA；

延伸引物序列如下：

Sea ID NO.19：CTAATTTTTGTATTTTCAGTAGAG；

Seq ID NO.20：GGCTGTGGAGGCAGATGGATCTCAGGCCAGCC；

Seq ID NO.21：GCAGTGTCCTCATACTCTTTTATTTCTTCTTGG；

Seq ID NO.22：CTCTCTGTCAAACAGGCATTCTTCCCCCC；

Seq ID NO.23：TGAAAAGTAAAAGAAGGTTAAAATA；

Seq ID NO.24：TCCCTTGCTCCCTCAGTACCCTGTCTCTCA；

Seq ID NO.25：CTCTAATCAGTATCGGTGAAGTCACC；

Seq ID NO.26：AAACCTGTCACCTTTTTTTTGGGGGGGG；

Sea ID NO.27：ATGAAATCTTTACAATTTATGCTTAGAGA。

2.一種結(jié)直腸癌易感基因SNP檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

S1.提取體液中游離的基因組；

S2.將基因組作為模板，加入如權(quán)利要求1所述的9對特異性引物，進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增；

S3.將擴(kuò)增產(chǎn)物中加入蝦堿性磷酸酶進(jìn)行多余引物及dNTP消化；

S4.將消化產(chǎn)物中加入權(quán)利要求1所述的9個延伸引物進(jìn)行單堿基延伸；

S5.將單堿基延伸產(chǎn)物進(jìn)行核酸質(zhì)譜檢測。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述結(jié)直腸癌易感基因SNP檢測方法，其特征在于所述S1具體為：采用QiagenDNA提取試劑盒從口腔拭子中提取cfDNA。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述結(jié)直腸癌易感基因SNP檢測方法，其特征在于所述S2的擴(kuò)增程序為：98℃/45s，1個循環(huán)；98℃/15s，60℃/30s，72℃/30s，40個循環(huán)；72℃/3min，1個循環(huán)；4℃/hold。