[發明專利]一種原發性肝癌的分子標記物檢測試劑盒、核酸組合及應用

有效

• 申請號: 202111446638.4
• 申請日: 2021-12-01
• 公開（公告）號: CN113846167B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 張瑋;李國強
• 申請（專利權）人: 蘇州艾米森生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 張金銘

本發明公開了一種原發性肝癌的分子標記物檢測試劑盒、核酸組合及應用，涉及肝癌診斷技術領域。本發明通過檢測Chr2：25216044?25216394區域及其反向互補序列中的CpG位點的甲基化水平，可以鑒別目標樣本是否為原發性肝癌。上述區域的CpG位點的甲基化對于原發性肝癌的檢測或診斷具有較好的靈敏度和特異性，可以用于區分肝癌樣本和健康樣本，以及肝癌樣本和肝硬化樣本。本發明為肝癌早篩提供了良好的分子標志物，具有早篩準確度高、無創、方便、安全、快捷、高通量的優勢。本發明提供的分子標志物有望提高我國肝細胞癌高風險人群的早診比例，實現早發現早治療，降低肝細胞癌發病率與死亡率。

技術領域

本發明涉及肝癌診斷技術領域，具體而言，涉及一種原發性肝癌的分子標記物檢測試劑盒、核酸組合及應用。

背景技術

原發性肝癌是我國第4位常見惡性腫瘤及第2位腫瘤致死病因。原發性肝癌主要包括肝細胞癌、肝內膽管癌和肝細胞癌-肝內膽管癌混合型3種不同病理學類型，其中肝細胞癌占85%～90%，其風險因素包括乙型/丙型肝炎病毒（HBV/HCV）感染、肥胖引起的非酒精性脂肪肝疾病、慢性酒精濫用等，這些因素可能直接導致肝硬化的發展，肝硬化患者每年發生肝癌的比率為2%-4%。

目前我國肝細胞癌診療指南推薦的方案是：高危人群，每隔6個月進行1次肝臟超聲檢查和血清甲胎蛋白（Alpha-fetoprotein，AFP）檢測，進行肝癌早期篩查。AFP是目前唯一可用的檢測和監測肝癌的血液標志物，當以20ng/ml為截斷值時，AFP的敏感性只有約60%，特異性只有80%多，難以滿足肝細胞癌早篩早診的臨床需求。影像學檢查對早期肝細胞癌的確診仍然相當困難，在實際應用中易受病灶大小、機器靈敏度及操作者水平等多種因素的影響。為了提高我國肝細胞癌高風險人群的早診比例，急需一種靈敏性和特異性高的檢測方法來普及肝癌早篩并提高早期篩查的準確度。

DNA甲基化是癌癥發生的早期事件，現有技術表明血液中的循環腫瘤DNA（Ct DNA）與腫瘤組織中的DNA有很強的一致性，表明可以通過檢測血液Ct DNA的甲基化實現肝癌的早期無創檢測。癌變過程中，DNA甲基化水平的異常多發生在CpG島內，CpG 島主要位于基因的啟動子和外顯子區域，是富含CpG 二核苷酸的區域，長度在200-3000bp 之間，G+C的含量超過50%。

目前已報道的肝細胞癌血液標記物很少，且靈敏性和準確性不高。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種原發性肝癌的分子標記物檢測試劑盒、核酸組合及應用以解決上述技術問題。

本發明是這樣實現的：

本發明提供了一種用于檢測原發性肝癌的分子標記物甲基化水平的物質在制備原發性肝癌檢測產品中的應用，具體地，分子標記物為SEQ ID NO.1所示序列中至少包含一個CpG位點的核酸分子，或為SEQ ID NO.2所示序列中至少包含一個CpG位點的核酸分子。

發明人發現通過檢測Chr2：25216044-25216394區域（以hg38基因組為參比基因組）及其反向互補序列中的CpG位點的甲基化水平，可以鑒別目標樣本是否為原發性肝癌。若目標樣本為原發性肝癌，則在上述區域的CpG位點為高甲基化水平，若目標樣本為正常樣本或肝硬化樣本，則在上述區域的CpG位點為低甲基化水平。

上述區域的CpG位點的甲基化對于原發性肝癌的檢測或診斷具有較好的靈敏度和特異性，可以用于區分肝癌樣本和健康樣本，以及肝癌樣本和肝硬化樣本。本發明為肝癌早篩提供了良好的分子標志物，具有早篩準確度高、無創、方便、安全、快捷、高通量的優勢。本發明提供的分子標志物有望提高我國肝細胞癌高風險人群的早診比例，實現早發現早治療，降低肝細胞癌發病率與死亡率。

Chr2：25216044-25216394區域的一條鏈的序列如下（SEQ ID NO.1）所示：