[發明專利]一種原發性肝癌的分子標記物檢測試劑盒、核酸組合及應用

有效

• 申請號: 202111446638.4
• 申請日: 2021-12-01
• 公開（公告）號: CN113846167B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 張瑋;李國強
• 申請（專利權）人: 蘇州艾米森生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 張金銘

1.用于檢測原發性肝癌的分子標記物甲基化水平的核酸組合在制備原發性肝癌檢測產品中的應用，其特征在于，所述分子標記物為位于如下至少一種CpG島區域內至少包含一個CpG位點的核酸分子：區域1、區域2、區域3、區域4和區域5；

其中，所述區域1選自Chr2: 25216048-25216151正鏈，所述區域2選自Chr2:25216146-25216277正鏈，所述區域3選自Chr2:25216265-25216351正鏈，所述區域4選自Chr2:25216390-25216264負鏈，所述區域5選自Chr2:25216250-25216075負鏈；

所述核酸組合選自如下核酸組合中的至少一種：用于檢測所述區域1的核酸組合1、用于檢測所述區域2的核酸組合2、用于檢測所述區域3的核酸組合3、用于檢測所述區域4的核酸組合4和用于檢測所述區域5的核酸組合5；

所述核酸組合1包括引物組合1，所述核酸組合2包括引物組合2，所述核酸組合3包括引物組合3，所述核酸組合4包括引物組合4，所述核酸組合5包括引物組合5；

所述引物組合1的堿基序列如SEQ ID NO.7-8所示，所述引物組合2的堿基序列如SEQID NO.10-11所示，所述引物組合3的堿基序列如SEQ ID NO.13-14所示，所述引物組合4的堿基序列如SEQ ID NO.16-17所示，所述引物組合5的堿基序列如SEQ ID NO.19-20所示；

所述核酸組合1還包括探針1，所述核酸組合2還包括探針2，所述核酸組合3還包括探針3，所述核酸組合4還包括探針4，所述核酸組合5還包括探針5；

所述探針1的堿基序列如SEQ ID NO.9所示，所述探針2的堿基序列如SEQ ID NO.12所示，所述探針3的堿基序列如SEQ ID NO.15所示，所述探針4的堿基序列如SEQ ID NO.18所示，所述探針5的堿基序列如SEQ ID NO.21所示。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述原發性肝癌檢測產品選自如下產品中的至少一種：試劑、試劑盒、芯片和測序文庫。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述甲基化水平通過如下至少一種的方法進行檢測：甲基化特異性PCR法、測序法、甲基化特異性高效液相層析法、數字PCR法、甲基化特異性高分辨率溶解曲線法、甲基化特異性微陣列法、甲基化敏感性限制性內切酶法和flap endonuclease 法。

4.一種試劑，其特征在于，其包括如下至少一種的核酸組合：核酸組合1、核酸組合2、核酸組合3、核酸組合4和核酸組合5；

所述核酸組合1包括引物組合1，所述核酸組合2包括引物組合2，所述核酸組合3包括引物組合3，所述核酸組合4包括引物組合4，所述核酸組合5包括引物組合5；

所述引物組合1的堿基序列如SEQ ID NO.7-8所示，所述引物組合2的堿基序列如SEQID NO.10-11所示，所述引物組合3的堿基序列如SEQ ID NO.13-14所示，所述引物組合4的堿基序列如SEQ ID NO.16-17所示，所述引物組合5的堿基序列如SEQ ID NO.19-20所示；

所述核酸組合1還包括探針1，所述核酸組合2還包括探針2，所述核酸組合3還包括探針3，所述核酸組合4還包括探針4，所述核酸組合5還包括探針5；

所述探針1的堿基序列如SEQ ID NO.9所示，所述探針2的堿基序列如SEQ ID NO.12所示，所述探針3的堿基序列如SEQ ID NO.15所示，所述探針4的堿基序列如SEQ ID NO.18所示，所述探針5的堿基序列如SEQ ID NO.21所示。

5.一種試劑盒，其特征在于，其包括權利要求4所述的試劑。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性對照、陰性對照、內參基因的檢測引物、內參基因的檢測探針、DNA聚合酶和緩沖液。