[發(fā)明專利]基于電化學(xué)信號底物放大檢測核酸的方法及試劑盒

在審

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• 申請日: 2021-11-30
• 公開（公告）號: CN116200464A
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李長明;張嫄媛;劉峰;鄒卓;史轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州科技大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/682
• 分類號: C12Q1/682;C12Q1/6825;G01N27/327
• 代理公司: 重慶航圖知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 50247
• 代理人: 胡小龍;朱嬌艷

1.基于電化學(xué)信號底物放大檢測核酸的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)在傳感電極上修飾特異識別待測核酸的核酸探針；

2)將待測核酸片段通過微流控通道送至傳感電極處，與傳感電極上的核酸探針1互補(bǔ)配對結(jié)合；通入清洗溶液洗清洗，留下配對物質(zhì)；然后與電化學(xué)酶標(biāo)的核酸探針2結(jié)合，通入清洗溶液洗清洗；通入底液，使標(biāo)記的電化學(xué)活性酶催化底物轉(zhuǎn)化為電化學(xué)活性物質(zhì)，用電化學(xué)方法進(jìn)行檢測；電化學(xué)信號可通過調(diào)高底液濃度或增長反應(yīng)時(shí)間放大；

或者，首先將待測核酸片段用電化學(xué)酶標(biāo)記，然后通過微流控通道送至傳感電極處，與傳感電極上的核酸探針1互補(bǔ)配對結(jié)合；通入清洗溶液洗清洗掉未配對物質(zhì)與未反應(yīng)的酶標(biāo)，僅留下配對物質(zhì)；通入底液，使標(biāo)記的電化學(xué)活性酶催化底物轉(zhuǎn)化為電化學(xué)活性物質(zhì)，用電化學(xué)方法進(jìn)行檢測；電化學(xué)信號可通過調(diào)高底液濃度或增長反應(yīng)時(shí)間放大。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于電化學(xué)信號底物放大檢測核酸的方法，其特征在于：傳感監(jiān)測的靈敏度和最低檢測限可由調(diào)節(jié)底物濃度或/和電化學(xué)反應(yīng)時(shí)間實(shí)現(xiàn)調(diào)控。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于電化學(xué)信號底物放大檢測核酸的方法，其特征在于：所述電化學(xué)酶為堿性磷酸酶；所述底物為含氨基苯基磷酸酯的PBS或含氨基苯基磷酸酯的碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于電化學(xué)信號底物放大檢測核酸的方法，其特征在于：所述傳感電極的材料為但不限于金屬、金屬氧化物、金屬碳化物、導(dǎo)電塑料、導(dǎo)電聚合物、碳材料或其組合物或混合物。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于電化學(xué)信號底物放大檢測核酸的方法，其特征在于：所述核酸探針為但不限于檢測癌癥、慢性病或病原微生物的核酸序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于電化學(xué)信號底物放大檢測核酸的方法，其特征在于：所述生物素化的電化學(xué)酶需要通過生物素和鏈酶親和素之間的親和作用結(jié)合到將電化學(xué)酶結(jié)合核酸捕獲探針2上。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于電化學(xué)信號底物放大檢測核酸的方法，其特征在于：所述傳感電極設(shè)置為能夠同時(shí)檢測至少一個待測核酸的微流控陣列芯片。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述基于電化學(xué)信號底物放大檢測核酸的方法，其特征在于：所述微流控陣列芯片外接進(jìn)樣系統(tǒng)，并通過控制系統(tǒng)控制樣品進(jìn)樣、信號采集、數(shù)據(jù)傳輸和數(shù)據(jù)處理。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于電化學(xué)信號底物放大檢測核酸的方法，其特征在于：所述檢測后還包括底物回收步驟，具體是將反應(yīng)液中的反應(yīng)產(chǎn)物分離，然后由反向電極還原生成電化學(xué)活性產(chǎn)物回收后循環(huán)利用。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于電化學(xué)信號底物放大檢測核酸的方法，其特征在于：所述雜交的條件為將待測核酸樣品配制于PBS中，室溫下進(jìn)行雜交反應(yīng)。

11.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于電化學(xué)信號底物放大檢測核酸的方法，其特征在于：所述待測核酸樣品為DNA或RNA。

12.基于電化學(xué)信號底物放大檢測核酸的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括核酸探針修飾傳感電極、PBS清洗液、鏈酶親和素化的核酸捕獲探針2、生物素化電化學(xué)酶和底物；所述電化學(xué)酶為堿性磷酸酶；所述底物為含氨基苯基磷酸酯的PBS或含氨基苯基磷酸酯的碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液

所述核酸探針和核酸捕獲探針2分別與待測核酸不同區(qū)域互補(bǔ)。